شفافية القرنية مفيدة لوضوح البصر. في السياق المرضي ، يمكن أن تشكل هذه الشفافية تحديا. تتطلب دراسة آلية التسبب في المرض نماذج بسيطة لها تشابه كبير مع العضو البشري.
في هذه الجوانب ، الزرد هو نموذج ممتاز. وهذا هو أول وصف مفصل لتآكل القرنية في أسماك الزرد. هذه التقنية هي طريقة بسيطة وسريعة للحث على دخول السطح إلى العين.
يمكن متابعة إغلاق الجرح بسهولة بعد التآكل. أيضا ، يمكن إضافة المواد الكيميائية ، أو عوامل محددة ، إلى مياه الخزان لدراسة تأثيرها على إغلاق الجرح. نظرا لأن الجرح يتم إنشاؤه يدويا ، فإن الطريقة تتطلب بعض الممارسة للحصول على نتائج متسقة.
قبل التجربة ، قم بإعداد حل عمل بنسبة 0.02٪ من التريكاين. إذابة 2 مل من محلول الأسهم 0.4 ٪. أضف إلى 40 مل من ماء النظام.
ووضع الحل في حاوية صغيرة. اجعل لدغة العيون جاهزة عن طريق التحقق مما إذا كان طرف اللدغ نظيفا. وإذا لزم الأمر ، قم بإزالة حطام الخلايا باستخدام قطعة قطن رطبة.
قم بعمل شق على جانب إسفنجة ناعمة. وترطيب الإسفنجة بماء النظام. ضع الإسفنجة على مسرح المجهر التشريحي.
ضمان مساحة عمل كافية لاستخدام لدغ. وإضاءة كافية من الجانب وأعلى لرؤية سطح العين بشكل صحيح. ضع السمك المخدر بلطف بملعقة في الشق الموجود على الإسفنجة مع بروز الرأس من سطح الإسفنج.
اقترب بعناية من سطح العين بطرف لدغ. وابدأ في تحريك الطرف على سطح العين بحركة دائرية. عند الانتهاء من التآكل ، ضع الأسماك بعناية في مياه النظام العذبة التي تحتوي على مسكن للتعافي.
نظف النتوء مباشرة بعد الاستخدام باستخدام قطعة قطن رطبة. التقط السمك في النقطة الزمنية المطلوبة وضعه في محلول تريكاين 0.02٪. احتفظ بالحيوان في المحلول حتى تتوقف حركة التشغيل تماما ولا تتفاعل الأسماك مع اللمس.
ضع السمك على طبق بتري بملعقة ، وأمسكه بملاقط. قطع رأس الأسماك بمقص تشريح. تجنب حدوث أي خدوش على سطح العين.
ضع الأنسجة في أنبوب عينة يحتوي على 0.1 مليون فوسفات الصوديوم. وشطفه بمخزن مؤقت نظيف بحيث لا يبقى الدم في المحلول. إصلاح الأنسجة في 2.5 ٪ غلوتارالدهيد في 0.1 مليون فوسفات الصوديوم لمدة 24 ساعة في 4 درجة مئوية.إزالة محلول التثبيت وشطف العينة عدة مرات مع 0.1 متر فوسفات الصوديوم.
تشريح العينة عن طريق وضعها على قطرة من 0.1 مليون فوسفات الصوديوم على لوحة تشريح. قطع عينة الرأس إلى قسمين باستخدام مقص تشريح دقيق. بدلا من ذلك ، اجمع العينين عن طريق وضع أطراف الملقط الدقيق بعناية في مآخذ العين من جانب العين.
ثم اسحب العين من المقبس وأزل الأنسجة الإضافية. انقل العينة المشوهة إلى أنبوب يحتوي على 0.1 مليون فوسفات الصوديوم. تأكد من عدم وجود أنسجة إضافية في أنبوب العينة، لأنها قد تلتصق بالجزء العلوي من العين أثناء معالجة العينة.
ضع الحامل مع علامة التبويب على حامل. وحامل إلى قاعدة المجهر تشريح. ضع عينة الأنسجة بلطف على الحامل باستخدام ملاقط دقيقة ، والقرنية متجهة لأعلى.
قم بتغطية العينة بالبلاتين باستخدام الجهاز المناسب. وتخزين العينات في درجة حرارة الغرفة حتى التصوير. احصل على صور للتكبير المطلوب.
واستخدم صور 2000 إلى 2500x للتحليل. اضبط السطوع والتباين لرؤية جميع حدود الخلايا والميكروريدج بوضوح. وتجنب المناطق المكشوفة بشكل مفرط في الصورة.
افتح صورة TIFF باستخدام فيجي ImageJ 1.53. واستخدم شريط مقياس لتعيين المقياس. قم بإنشاء خط يساوي شريط المقياس باستخدام أداة الخط.
حدد تحليل. ثم، تعيين المقياس. واكتب في المسافة المعروفة.
ثم افتح مدير عائد الاستثمار باستخدام القائمة تحليل، أدوات. بالنسبة لحجم الخلية واستدارتها، حدد تحليل، تعيين القياسات، واصفات الشكل. واستخدم أداة العدسة المكبرة لرؤية الخلايا تحت التكبير.
حدد الخلايا باستخدام أداة المضلع، وأضف كل تحديد إلى مدير عائد الاستثمار. وأخيرا، قم بقياس الخلايا المحددة، واحفظ القياس. للمضي قدما في تحليل microridge ، تأكد من أن الصورة بتنسيق 8 بت بالنقر فوق القائمة صورة ، نوع.
ثم حدد الخلية باستخدام أداة المضلع. ومسح الخلفية بالنقر فوق تحرير، ثم مسح في الخارج. قم بتنعيم الصورة من مرة إلى ثلاث مرات عن طريق تحديد معالجة، سلسة.
واضبط السطوع والتباين من الصورة ، اضبط ، السطوع / التباين ، بحيث تبرز microridges بأكبر قدر ممكن من الوضوح. قم بتجميع الصورة بالنقر فوق عملية ، فلاتر ، مشاركة. وقم بتحويله إلى ثنائي بالنقر فوق عملية ، ثنائي ، جعل ثنائي.
ثم، قم بتهيئة الهيكل العظمي للصورة بالأبيض والأسود عن طريق تحديد عملية، ثنائي، هيكل عظمي. استخدم الدالة تحليل الهيكل العظمي لقياس معلمات microridge وحفظ القيم. يتم إغلاق منطقة الجرح في ثلاث ساعات بعد الجرح.
لكن الموقع الذي يتم فيه ربط حدود الجرح لا يزال مرئيا. أظهرت النتائج أنه يمكن ملاحظة الميكروريدات الدقيقة في ظهارة القرنية المتآكلة في بعض الخلايا الممدودة بجوار موقع الجرح. في بعض المناطق الطرفية ، يتم فقدان microridges من وسط الخلية.
أظهرت المقارنة بين منطقتي المناطق الطرفية خلايا ممدودة ذات متوسط ميكروريدج أقصر ، مما يشير إلى إعادة ترتيب الخلايا كرد فعل على الجرح. تشير هذه النتائج إلى أن التغيرات في شكل الخلية ترتبط بتعديل microridge وتؤكد على عدم التجانس داخل ظهارة القرنية في استجابة الجرح. تذكر أن العملية تتطلب تدريبا على إجراء جرح متجانس وقابل للتكرار.
بالإضافة إلى المجهر الإلكتروني ، يمكن استخدام الأنسجة في علم الأنسجة والبقع المناعية والتهجين في الموقع. هذه سوف توفر المزيد من البصيرة في الخلايا والتغيرات الجزيئية أثناء التئام الجروح. استخدام الزرد يوسع معرفتنا في بيولوجيا القرنية.
علاوة على ذلك ، هذا النموذج ممتاز للدراسات الدوائية ، ويمكن استخدامه لفهم المزيد عن تطور العين.
