تخلق أساليبنا نموذجا موثوقا لسرطان الخلايا الكبدية ناقص الأكسجين للتصوير غير الباضع لنقص الأكسجة في الورم لدراسة بيولوجيا سرطان الكبد في الجسم الحي ، والتي يمكن أن تلخص بشكل أفضل تطور السرطان لدى البشر. يعمل نموذج HCC الموثوق به جنبا إلى جنب مع طريقة الصورة القابلة للإنتاج بشكل كبير كمنصة مهمة للبحث الانتقالي في الفيزيولوجيا المرضية لسرطان الكبد البشري. توفر المراقبة في الوقت الفعلي لنقص الأكسجة في الورم نظرة ثاقبة للتغيرات الجزيئية التي تؤدي إلى عدوانية الورم ، مما يسمح بتحديد مناطق نقص الأكسجة والتنبؤ بالاستجابة للعلاج.
على الرغم من أن الجراحة داخل البطن يمكن أن تكون صعبة من الناحية الفنية ، إلا أن التخطيط المناسب ورعاية الحيوانات سيحسن معدل نجاح الجراحة بشكل عام ورفاهية الحيوانات الصغيرة. للبدء ، قم بتعقيم المنطقة الظهرية للفأر المخدر البالغ من العمر 6 إلى 8 أسابيع إما في الجانب الأيسر أو الأيمن من الجناح السفلي باستخدام 70٪ من الإيثانول. ثم استخدم الملقط لرفع الجلد وأدخل إبرة الحقن تحتها برفق.
لتجنب التسرب العرضي لتعليق الخلية المحقونة أثناء سحب الإبرة، ادفع الإبرة من 4 إلى 5 ملليمترات من موقع البزل على طول المستوى تحت الجلد. بعد تحرير الملقط ، قم بتفريغ محتويات المحقنة بعناية دون اختراق الجانب الآخر. بعد القتل الرحيم للفأر الحامل للورم تحت الجلد ، قم بعمل شق على جلد موقع الورم بشفرة مشرط.
ثم ، قم باستئصال كتلة الورم ونقلها على الفور إلى وسائط الثقافة. بعد ذلك ، باستخدام مقص جراحي حاد ، قم بقطع كتلة الورم إلى مكعبات صغيرة 1 ملليمتر مكعب ، وتجنب المنطقة الأساسية لكتلة الورم. احتفظ بجميع المكعبات في وسائط الثقافة.
لزرع الكبد التقويمي ، قم بتمديد أطراف الفأر المخدر وتثبيتها بشريط لاصق لكشف البطن البطني والصدر إلى أقصى حد. ثم تعقيم جلد البطن بالكامل بمحلول 10٪ بوفيدون اليود متبوعا ب 70٪ إيثانول. بعد ذلك ، قم بإجراء بضع البطن عن طريق إجراء شق في خط الوسط من 10 ملم باستخدام مقص حاد للوصول إلى الصفاق.
بعد ذلك ، قم بتثبيت وسحب عملية الخنجري نحو الرأس بالملقط وافتح المجال الجراحي باستخدام مبعدات تحت الضلع. باستخدام مسحة الشاش الرطب ، اسحب فصوص الكبد المتوسطة واليسرى لأعلى. ثم ، حرك الأمعاء خارج البطن إلى الجانب الأيسر من الماوس وقم بتغطيتها بقطعة شاش مبللة.
بعد ذلك ، تحت مصباح مكبرة للحصول على التصور الأمثل ، قم بإجراء ربط الشريان الكبدي على الشريان الكبدي المشترك ، والذي ينشأ من رأس البنكرياس إلى جذره في عنيق الكبد. فضح الفص الأيسر عن طريق سحب ظهر الفص المتوسط والأيسر بقطعة شاش مبللة. ثم ، باستخدام شفرة مشرط معقمة ، قم بعمل شق يبلغ طوله حوالي 2 ملم وعميق في الفص الأيسر ، وأدخل على الفور جزءا من الورم في شق الكبد باستخدام ملقط معقم.
دفن الورم بشكل آمن في الكبد قبل تطبيق خياطة الشكل الثامن ، مع خياطة 6-0 نايلون على موقع الشق لضمان زرع الورم والإرقاء المناسبين. ثم أغلق شق البطن بخيوط متقطعة 5-0. قم بتوزيع حصة من 18-FMISO على أنبوب وقم بتخفيفه بمحلول ملحي معقم لضمان تركيز نشاط إجمالي من 18 إلى 20 ميغابيكريل في 100 ميكرولتر.
بعد ذلك ، ارسم المحلول باستخدام حقنة 1 ملليلتر وسجل النشاط الإشعاعي والوقت الموضح على معاير الجرعة. بعد تسجيل وزن جسم الفأر الموضوع ، قم بحقن المقتفي الإشعاعي المحضر بعناية من خلال الوريد الذيل. لحساب تصحيح الاضمحلال ، سجل وقت الحقن والنشاط المتبقي في المحقنة.
لبدء اقتناء PET ، حدد موقع الماوس في الماسح الضوئي عن طريق إجراء عرض الكشافة. اضبط موضع سرير الماوس للتأكد من أن جسم الماوس بالكامل مع منطقة الجذع في وسط مجال رؤية MR. بعد ذلك ، حدد اكتساب PET في نافذة قائمة الدراسة. لاستخدام مواضع سرير الماوس المحددة مسبقا من طريقة عرض الكشافة، اختر نطاق المسح الضوئي عند الاكتساب السابق.
ثم ، انقر فوق إعداد لنقل سرير الماوس تلقائيا من MR إلى PET ، متبوعا ب Go لبدء الاستحواذ. حدد النوكليوتيدات المشعة المناسبة ضمن محرر المستحضرات الصيدلانية الإشعاعية وأدخل تفاصيل جرعة الحقن ووقتها. بالإضافة إلى ذلك ، ضمن قائمة معلومات الموضوع ، أدخل وزن الماوس.
بمجرد اكتمال فحص التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني، حدد إعداد لنقل الماوس من التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني إلى التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني، وانقر فوق انتقال لإجراء اقتناء التصوير بالرنين المغناطيسي. بمجرد الانتهاء من جميع عمليات الفحص، حرك قاعدة التصوير مرة أخرى إلى الموضع الافتراضي عن طريق تحديد Table Out. كشف التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني المستخدم في هذه الدراسة عن زيادة في امتصاص الورم ل 18-FMISO في الفئران المصابة بربط الشريان الكبدي ولكن ليس في الفئران الضابطة.
ومع ذلك ، كان امتصاص الورم للعلامة المحللة للسكر 18F-FDG مشابها في الفئران مع وبدون ربط الشريان الكبدي. كشف القياس الكمي باستخدام هذا النهج القائم على قيمة الامتصاص القياسي عن امتصاص 18-FMISO أعلى بمقدار 2.3 مرة من الأورام في الفئران المصابة بربط الشريان الكبدي مقارنة بالفئران الضابطة. وبالمثل ، كان امتصاص 18-FMISO أعلى في أكباد الفئران المصابة بربط الشريان الكبدي مقارنة بكبد الفئران الضابطة.
أدى ربط الشريان الكبدي أيضا إلى تعزيز نقص الأكسجة في الورم ، كما يتضح من ارتفاع مستوى تعبير العامل 1-ألفا المحرض لنقص الأكسجة في إفرازات الورم من الفئران المصابة بربط الشريان الكبدي مقارنة بالفئران الضابطة. بعد تصوير 18-FMISO PET ، يمكن إجراء تسلسلنا لتحديد أدوار الجينات الأيضية المستحثة تحت نقص الأكسجة ، مما يؤدي إلى استراتيجيات علاج جديدة. يمكن استخدام هذه التقنية لمراقبة نقص الأكسجة في الورم بدقة ، مما يسمح بإجراء تقييم سريع لفعالية العلاج وأيضا إنشاء استراتيجية علاجية جديدة تستهدف مسار نقص الأكسجة في سرطان الكبد.
