Nossos métodos criam um modelo confiável de carcinoma hepatocelular hipóxico para imagens não invasivas de hipóxia tumoral para estudar a biologia do CHC in vivo, o que pode recapitular melhor o desenvolvimento do câncer em humanos. Nosso modelo confiável de CHC, juntamente com um método de imagem altamente produtível, serve como uma importante plataforma para a pesquisa translacional sobre a fisiopatologia do CHC humano. O monitoramento em tempo real da hipóxia tumoral fornece insights sobre as mudanças moleculares que levam à agressividade do tumor, permitindo determinar áreas de hipóxia e prever a resposta ao tratamento.
Embora a cirurgia intra-abdominal possa ser tecnicamente desafiadora, o planejamento adequado e o cuidado com os animais melhorarão a taxa geral de sucesso da cirurgia e o bem-estar dos pequenos animais. Para começar, esterilize a região dorsal de um rato anestesiado de 6 a 8 semanas de idade, seja no lado esquerdo ou direito do flanco inferior com etanol a 70%. Em seguida, use fórceps para levantar a pele e insira suavemente a agulha de injeção por baixo.
Para evitar o vazamento acidental da suspensão celular injetada durante a retirada da agulha, avance a agulha 4 a 5 milímetros do local da punção ao longo do plano subcutâneo. Depois de soltar a pinça, descarregue cuidadosamente o conteúdo da seringa sem penetrar no lado oposto. Depois de eutanasiar o rato portador de tumor subcutâneo, faça uma incisão na pele do local do tumor com uma lâmina de bisturi.
Em seguida, extirpe o bloqueio tumoral e transfira-o imediatamente para o meio de cultura. Em seguida, usando uma tesoura cirúrgica afiada, corte o bloco tumoral em pequenos cubos de 1 milímetro cúbico, evitando a região central do bloqueio tumoral. Mantenha todos os cubos na mídia de cultura.
Para o implante hepático ortotópico, estenda os membros de um rato anestesiado e prenda-os com fita adesiva para expor ao máximo o abdômen ventral e o tórax. Em seguida, esterilizar toda a pele abdominal com solução de iodopovidona a 10% seguida de etanol a 70%. Em seguida, realize uma laparotomia primeiro fazendo uma incisão na linha média de 10 milímetros usando tesouras afiadas para acessar o peritônio.
Em seguida, prenda e puxe o processo xifoide em direção à cabeça com pinça e abra o campo cirúrgico usando afastadores subcostais. Usando um cotonete de gaze molhado, retraia os lobos medianos e esquerdos do fígado para cima. Em seguida, mova os intestinos para fora do abdômen para o lado esquerdo do rato e cubra-os com um cotonete de gaze molhado.
Em seguida, sob uma lâmpada de aumento para visualização ideal, realize a ligadura da artéria hepática na artéria hepática comum, que se origina da cabeça pancreática até sua raiz no pedículo hepático. Exponha o lobo esquerdo retraindo as costas mediana e do lobo esquerdo com um cotonete de gaze molhado. Em seguida, usando uma lâmina de bisturi estéril, faça uma incisão de cerca de 2 milímetros de comprimento e profundidade no lobo esquerdo e insira imediatamente um fragmento de tumor na incisão hepática com pinça estéril.
Enterre o tumor com segurança no fígado antes de aplicar uma sutura de figura oito, com uma sutura de nylon 6-0 sobre o local da incisão para garantir a implantação adequada do tumor e a hemostasia. Em seguida, feche a incisão abdominal com suturas 5-0 interrompidas. Dispensar uma alíquota de 18-FMISO a um tubo e diluí-lo com solução salina estéril para garantir uma concentração de atividade total de 18 a 20 megabecquerel em 100 microlitros.
Em seguida, retire a solução com uma seringa de 1 mililitro e registre a radioatividade e o tempo mostrados no calibrador de dose. Depois de registrar o peso corporal do camundongo em questão, injete cuidadosamente o radiotraçador preparado através da veia da cauda. Para explicar a correção do decaimento, registre o tempo de injeção e a atividade residual na seringa.
Para iniciar a aquisição do PET, localize a posição do mouse no scanner executando uma visualização de scout. Ajuste a posição do leito do mouse para garantir que todo o corpo do mouse com a região do tronco esteja no centro do campo de visão da RM. Em seguida, selecione Aquisição de PET na janela da lista de estudos. Para usar as posições predeterminadas do leito do mouse na visualização do scout, escolha Scan Range on Previous Acquisition.
Em seguida, clique em Preparar para mover automaticamente o leito do mouse de MR para PET, seguido por Ir para iniciar a aquisição. Selecione o radionucleotídeo apropriado no Editor de Radiofármacos e insira os detalhes da dose e do tempo de injeção. Além disso, no menu Informações do assunto, insira a espessura do mouse.
Quando a varredura PET estiver concluída, selecione Preparar para mover o mouse de PET para MR e clique em Ir para executar a aquisição de MR. Quando todas as varreduras estiverem concluídas, mova o leito de imagem de volta para a posição padrão selecionando Tabela. A imagem PET utilizada neste estudo revelou um aumento na captação tumoral de 18-FMISO em camundongos com ligadura da artéria hepática, mas não em camundongos controle.
No entanto, a captação tumoral do marcador glicolítico 18F-FDG foi semelhante em camundongos com e sem ligadura da artéria hepática. A quantificação usando essa abordagem padronizada baseada em valor de captação revelou uma captação de 18-FMISO 2,3 vezes maior por tumores em camundongos com ligadura da artéria hepática do que em camundongos controle. Da mesma forma, a captação de 18-FMISO foi maior nos fígados de camundongos com ligadura da artéria hepática do que nos fígados de camundongos controle.
A ligadura da artéria hepática também resultou em hipóxia tumoral aumentada, como evidenciado por um nível mais alto de expressão do fator 1-alfa induzível por hipóxia nas secreções tumorais de camundongos com ligadura da artéria hepática do que aqueles de camundongos controle. Após a imagem PET 18-FMISO, nosso sequenciamento pode ser realizado para identificar os papéis dos genes metabólicos induzidos sob hipóxia, levando a novas estratégias de tratamento. Esta técnica pode ser utilizada para monitorar com precisão a hipóxia tumoral, permitindo assim uma rápida avaliação da eficácia do tratamento e também a criação de uma nova estratégia terapêutica visando a via da hipóxia no CHC.
