השיטות שלנו יוצרות מודל אמין של קרצינומה הפטוצלולרית היפוקסית להדמייה לא פולשנית של היפוקסיה גידולית כדי לחקור ביולוגיה של HCC in vivo, אשר יכולה לשחזר טוב יותר את התפתחות הסרטן בבני אדם. מודל HCC האמין שלנו יחד עם שיטת תמונה בעלת יכולת ייצור גבוהה משמשים פלטפורמה חשובה למחקר תרגומי לפתופיזיולוגיה של HCC האנושי. ניטור בזמן אמת של היפוקסיה גידולית מספק תובנות לגבי שינויים מולקולריים המובילים לאגרסיביות של הגידול, ומאפשר לקבוע אזורים של היפוקסיה ולחזות תגובה לטיפול.
למרות שניתוח תוך בטני יכול להיות מאתגר מבחינה טכנית, תכנון הולם וטיפול בבעלי חיים ישפרו את שיעור ההצלחה הכולל של הניתוח ואת רווחתם של בעלי חיים קטנים. כדי להתחיל, לעקר את האזור הגבי של עכבר מורדם 6 עד 8 שבועות או בצד שמאל או ימין של האגף התחתון עם 70% אתנול. לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי להרים את העור והכנס בעדינות את מחט ההזרקה מתחת.
כדי למנוע דליפה מקרית של תרחיף התא המוזרק במהלך משיכת המחט, מקדמים את המחט 4 עד 5 מילימטרים מאתר הניקוב לאורך המישור התת עורי. לאחר שחרור המלקחיים, פורקים בזהירות את תוכן המזרק מבלי לחדור לצד הנגדי. לאחר המתת חסד העכבר הנושא גידול תת עורי, לבצע חתך על העור של אתר הגידול עם להב אזמל.
לאחר מכן, הבלו את בלוק הגידול ומיד להעביר אותו לתקשורת התרבות. לאחר מכן, באמצעות מספריים כירורגיים חדים, לחתוך את בלוק הגידול לתוך קוביות קטנות 1 מ"ק, הימנעות מאזור הליבה של בלוק הגידול. שמרו את כל הקוביות במדיה התרבותית.
להשתלת כבד אורתוטופית, האריכו את הגפיים של עכבר מורדם ואבטחו אותן באמצעות סרט הדבקה כדי לחשוף באופן מקסימלי את הבטן הגחונית ואת בית החזה. לאחר מכן, לעקר את כל עור הבטן עם תמיסת 10% פובידון-יוד ואחריה 70% אתנול. לאחר מכן, לבצע laparotomy על ידי ביצוע תחילה חתך קו אמצע של 10 מ"מ באמצעות מספריים חדים כדי לגשת הצפק.
לאחר מכן, מהדק ומשוך את תהליך הקסיפואיד לכיוון הראש עם מלקחיים ופתח את שדה הניתוח באמצעות retractors subcostal. בעזרת מקלון גזה רטוב, מושכים את אונות הכבד החציוניות והשמאליות כלפי מעלה. לאחר מכן, להעביר את המעיים מחוץ לבטן על הצד השמאלי של העכבר ולכסות אותם עם ספוגית גזה רטובה.
לאחר מכן, תחת מנורה מגדלת להדמייה אופטימלית, לבצע קשירת עורק הכבד על עורק הכבד המשותף, שמקורו מראש הלבלב לשורשו בפדיקור הכבד. חשוף את האונה השמאלית על ידי משיכת גב החציון והאונה השמאלית עם מקלון גזה רטוב. לאחר מכן, באמצעות להב אזמל סטרילי, לבצע חתך של כ 2 מ"מ אורך ועמוק באונה השמאלית, ומיד להכניס קטע גידול לתוך חתך הכבד עם מלקחיים סטריליים.
יש לקבור את הגידול היטב בכבד לפני ביצוע תפר הספרה שמונה, עם תפר ניילון 6-0 מעל אתר החתך כדי להבטיח השתלת גידול והמוסטאזיס תקינים. לאחר מכן, סגור את חתך הבטן עם תפרים קטועים 5-0. מוציאים אליקוט של 18-FMISO לצינור ומדללים אותו במי מלח סטריליים כדי להבטיח ריכוז פעילות כולל של 18 עד 20 מגה-בקרל ב-100 מיקרוליטר.
לאחר מכן, צייר את הפתרון עם מזרק 1 מיליליטר ולהקליט את הרדיואקטיביות ואת הזמן המוצג על כיול המינון. לאחר הקלטת משקל הגוף של עכבר הנושא, בזהירות להזריק את radiotracer מוכן דרך הזנב וריד. כדי להסביר את תיקון העששת, רשום את זמן ההזרקה ואת הפעילות השיורית במזרק.
כדי להתחיל ברכישת PET, אתר את מיקום העכבר בסורק על-ידי ביצוע תצוגת סקאוט. כוונן את מיקום מיטת העכבר כדי להבטיח שכל גוף העכבר עם אזור פלג הגוף העליון נמצא במרכז שדה הראייה של MR. לאחר מכן, בחר רכישת PET בחלון רשימת המחקר. לשימוש בתנוחות מיטת העכבר שנקבעו מראש מתצוגת הסקאוט, בחרו 'סרוק טווח ברכישה קודמת'.
לאחר מכן, לחץ על הכן כדי להעביר אוטומטית את מיטת העכבר מ- MR ל- PET, ולאחר מכן עבור כדי להתחיל את הרכישה. בחר את הרדיונוקלאוטיד המתאים תחת עורך התרופות הרדיופרמצבטיות והזן את פרטי מינון ההזרקה וזמן. בנוסף, תחת תפריט מידע נושא, הזן את משקל העכבר.
לאחר השלמת סריקת ה-PET, בחר הכן כדי להעביר את העכבר מ-PET ל-MR ולחץ על Go כדי לבצע את רכישת MR. לאחר סיום כל הסריקות, הזז את מיטת ההדמיה בחזרה למיקום ברירת המחדל על-ידי בחירה באפשרות Table Out. הדמיית PET ששימשה במחקר זה חשפה עלייה בספיגת הגידול של 18-FMISO בעכברים עם קשירת עורק הכבד אך לא בעכברי ביקורת.
עם זאת, ספיגת הגידול של הסמן הגליקוליטי 18F-FDG הייתה דומה בעכברים עם וללא קשירת עורק הכבד. כימות באמצעות גישה מתוקננת זו המבוססת על ערך ספיגה גילה ספיגה גבוהה פי 2.3 של 18-FMISO על ידי גידולים בעכברים עם קשירת עורק הכבד מאשר בעכברי ביקורת. באופן דומה, ספיגת 18-FMISO הייתה גבוהה יותר בכבדים של עכברים עם קשירת עורק כבד מאשר בכבדים של עכברי ביקורת.
קשירת עורק הכבד הביאה גם להיפוקסיה מוגברת של הגידול, כפי שמעידה רמה גבוהה יותר של ביטוי גורם 1-אלפא המושרה בהיפוקסיה בהפרשות הגידול מעכברים עם קשירת עורק הכבד מאשר אלה מעכברי ביקורת. לאחר הדמיית PET 18-FMISO, ניתן לבצע את הריצוף שלנו כדי לזהות את תפקידם של גנים מטבוליים המושרים תחת היפוקסיה, מה שמוביל לאסטרטגיות טיפול חדשות. טכניקה זו יכולה לשמש כדי לפקח על היפוקסיה הגידול במדויק, ובכך לאפשר הערכה מהירה של יעילות הטיפול וגם יצירת אסטרטגיה טיפולית חדשה המתמקדת מסלול היפוקסיה HCC.
