Yöntemlerimiz, insanlarda kanser gelişimini daha iyi özetleyebilen HCC biyolojisini in vivo olarak incelemek için tümör hipoksisinin noninvaziv görüntülenmesi için güvenilir bir hipoksik hepatosellüler karsinom modeli oluşturur. Güvenilir HCC modelimiz, yüksek oranda üretilebilir bir görüntü yöntemiyle birlikte, insan HCC'sinin patofizyolojisine yönelik translasyonel araştırmalar için önemli bir platform görevi görür. Tümör hipoksisinin gerçek zamanlı izlenmesi, tümör agresifliğine yol açan moleküler değişiklikler hakkında fikir verir, hipoksi alanlarının belirlenmesine ve tedaviye yanıtın tahmin edilmesine olanak tanır.
İntraabdominal cerrahi teknik olarak zor olsa da, yeterli planlama ve hayvan bakımı, genel cerrahi başarı oranını ve küçük hayvanların refahını artıracaktır. Başlamak için, anestezi uygulanan 6 ila 8 haftalık bir farenin dorsal bölgesini, alt kanadın sol veya sağ tarafında% 70 etanol ile sterilize edin. Ardından, cildi kaldırmak için forseps kullanın ve enjeksiyon iğnesini yavaşça altına yerleştirin.
İğne çekilmesi sırasında enjekte edilen hücre süspansiyonunun kazara sızmasını önlemek için, iğneyi deri altı düzlemi boyunca delinme bölgesinden 4 ila 5 milimetre ilerletin. Forsepsleri serbest bıraktıktan sonra, şırınganın içeriğini karşı tarafa nüfuz etmeden dikkatlice boşaltın. Subkutan tümör taşıyan fareyi ötenazi yaptıktan sonra, tümör bölgesinin derisinde bir neşter bıçağı ile bir kesi yapın.
Ardından, tümör bloğunu tüketin ve hemen kültür ortamına aktarın. Daha sonra, keskin cerrahi makas kullanarak, tümör bloğunu küçük 1 milimetreküp küpler halinde kesin ve tümör bloğunun çekirdek bölgesinden kaçının. Tüm küpleri kültür medyasında tutun.
Ortotopik karaciğer implantasyonu için, anestezi uygulanmış bir farenin uzuvlarını uzatın ve ventral karın ve toraksı maksimum düzeyde açığa çıkarmak için bunları bantla sabitleyin. Daha sonra, tüm karın derisini% 10 povidon-iyot çözeltisi veyasıyla% 70 etanol ile sterilize edin. Daha sonra, peritona erişmek için keskin makas kullanarak önce 10 milimetrelik bir orta hat kesisi yaparak bir laparotomi yapın.
Daha sonra, ksifoid işlemi forseps ile kafaya doğru kelepçeleyin ve çekin ve subkostal retraktörleri kullanarak cerrahi alanı açın. Islak bir gazlı bez kullanarak, medyan ve sol karaciğer loblarını yukarı doğru geri çekin. Ardından, bağırsakları karın dışına farenin sol tarafına taşıyın ve ıslak bir gazlı bezle örtün.
Daha sonra, optimum görselleştirme için büyüteç lambası altında, pankreas kafasından hepatik pediküldeki köküne kadar uzanan ortak hepatik arter üzerinde hepatik arter ligasyonu gerçekleştirin. Medyanı ve sol lobun sırtını ıslak bir gazlı bezle geri çekerek sol lobu açığa çıkarın. Daha sonra, steril bir neşter bıçağı kullanarak, sol lobda yaklaşık 2 milimetre uzunluğunda ve derinliğinde bir kesi yapın ve hemen steril forsepslerle karaciğer insizyonuna bir tümör parçası yerleştirin.
Uygun tümör implantasyonunu ve hemostazı sağlamak için insizyon bölgesi üzerinde 6-0 naylon sütür ile sekiz rakamlı bir sütür uygulamadan önce tümörü karaciğere güvenli bir şekilde gömün. Daha sonra karın kesisini kesilmiş 5-0 dikişle kapatın. Bir tüpe 18-FMISO'luk bir aliquot dağıtın ve 100 mikrolitrede toplam 18 ila 20 megabecquerel aktivite konsantrasyonu sağlamak için steril salin ile seyreltin.
Daha sonra, çözeltiyi 1 mililitrelik bir şırınga ile çizin ve doz kalibratöründe gösterilen radyoaktiviteyi ve zamanı kaydedin. Denek farenin vücut ağırlığını kaydettikten sonra, hazırlanan radyotracer'ı kuyruk damarından dikkatlice enjekte edin. Çürük düzeltmesini hesaba katmak için, enjeksiyon süresini ve şırıngadaki artık aktiviteyi kaydedin.
PET alımına başlamak için, bir keşif görünümü gerçekleştirerek tarayıcıda fare konumunu bulun. Gövde bölgesi ile tüm fare gövdesinin MR'nin görüş alanının merkezinde olduğundan emin olmak için fare yatağı konumunu ayarlayın. Ardından, etüt listesi penceresinde PET Alımı'nı seçin. İzci görünümünden önceden belirlenmiş fare yatağı konumlarını kullanmak için Önceki Edinme'de Tarama Aralığı'nı seçin.
Ardından, fare yatağını otomatik olarak MR'den PET'e taşımak için Hazırla'ya ve ardından edinimi başlatmak için Git öğesine tıklayın. Radyofarmasötik Editör altında uygun radyonükleotidi seçin ve enjeksiyon dozu ve zamanının ayrıntılarını girin. Ayrıca, Konu Bilgileri menüsü altında, farenin ağırlığını girin.
PET taraması tamamlandıktan sonra, fareyi PET'ten MR'ye taşımak için Hazırla'yı seçin ve MR alımını gerçekleştirmek için Git'i tıklatın. Tüm taramalar tamamlandıktan sonra, Tablo Çıkışı'nı seçerek görüntüleme yatağını varsayılan konumuna geri getirin. Bu çalışmada kullanılan PET görüntüleme, hepatik arter ligasyonu olan farelerde 18-FMISO tümör alımında bir artış olduğunu ancak kontrol farelerinde olmadığını ortaya koymuştur.
Bununla birlikte, glikolitik belirteç 18F-FDG'nin tümör alımı, hepatik arter ligasyonu olan ve olmayan farelerde benzerdi. Bu standartlaştırılmış alım değerine dayalı yaklaşımı kullanarak yapılan niceleme, hepatik arter ligasyonu olan farelerde tümörler tarafından kontrol farelerinden 2.3 kat daha yüksek 18-FMISO alımını ortaya koymuştur. Benzer şekilde, 18-FMISO alımı, hepatik arter ligasyonu olan farelerin karaciğerlerinde, kontrol farelerinin karaciğerlerinden daha yüksekti.
Hepatik arter ligasyonu ayrıca, hepatik arter ligasyonu olan farelerden gelen tümör sekresyonlarında, kontrol farelerinden elde edilenlerden daha yüksek düzeyde hipoksi ile indüklenebilir faktör 1-alfa ekspresyonu ile kanıtlandığı gibi, artmış tümör hipoksisi ile sonuçlandı. 18-FMISO PET görüntülemeden sonra, hipoksi altında indüklenen metabolik genlerin rollerini tanımlamak için dizilememiz yapılabilir ve bu da yeni tedavi stratejilerine yol açar. Bu teknik, tümör hipoksisini doğru bir şekilde izlemek için kullanılabilir, böylece tedavi etkinliğinin hızlı bir şekilde değerlendirilmesine ve HCC'de hipoksi yolunu hedefleyen yeni terapötik stratejinin oluşturulmasına olanak tanır.
