우리의 방법은 생체 내 HCC 생물학을 연구하기 위해 종양 저산소증의 비침습적 이미징을 위한 신뢰할 수 있는 저산소성 간세포 암종 모델을 생성하여 인간의 암 발병을 더 잘 요약할 수 있습니다. 당사의 신뢰할 수 있는 간세포암종 모델은 고재현성 이미지 분석법과 함께 인간 간세포암종의 병태생리학에 대한 중개 연구를 위한 중요한 플랫폼 역할을 합니다. 종양 저산소증의 실시간 모니터링은 종양 공격성으로 이어지는 분자 변화에 대한 통찰력을 제공하여 저산소증 영역을 결정하고 치료에 대한 반응을 예측할 수 있습니다.
복강 내 수술은 기술적으로 어려울 수 있지만 적절한 계획과 동물 관리는 전반적인 수술 성공률과 작은 동물의 웰빙을 향상시킬 것입니다. 시작하려면 마취 된 6-8 주 된 마우스의 등쪽 부위를 아래쪽 옆구리의 왼쪽 또는 오른쪽에 70 % 에탄올로 소독하십시오. 그런 다음 집게를 사용하여 피부를 들어 올리고 주사 바늘을 부드럽게 삽입하십시오.
바늘 철수 중 주입 된 세포 현탁액의 우발적 인 누출을 방지하려면 피하 평면을 따라 천자 부위에서 바늘을 4-5 밀리미터 전진시킵니다. 집게를 놓은 후 반대쪽을 관통하지 않고 주사기의 내용물을 조심스럽게 배출하십시오. 종양이 있는 마우스를 피하 안락사시킨 후 메스 칼날로 종양 부위의 피부를 절개합니다.
그런 다음 종양 블록을 절제하고 즉시 배양 배지로 옮깁니다. 다음으로, 날카로운 수술 용 가위를 사용하여 종양 블록을 작은 1 입방 밀리미터 입방체로 자르고 종양 블록의 핵심 영역을 피하십시오. 모든 큐브를 배양 배지에 보관합니다.
동소 간 이식의 경우 마취 된 마우스의 팔다리를 펴고 테이프로 고정하여 복부 복부와 흉부를 최대한 노출시킵니다. 그런 다음 복부 피부 전체를 10% 포비돈 요오드 용액과 70% 에탄올로 소독합니다. 다음으로, 먼저 날카로운 가위로 10mm의 정중선을 절개하여 복막에 접근하여 개복술을 시행합니다.
그런 다음 집게로 검상돌기를 머리 쪽으로 고정하고 당기고 늑골하 견인기를 사용하여 수술 부위를 엽니다. 젖은 거즈 면봉을 사용하여 중앙 및 왼쪽 간엽을 위쪽으로 집어 넣습니다. 그런 다음 복부 바깥쪽의 내장을 마우스의 왼쪽으로 옮기고 젖은 거즈 면봉으로 덮습니다.
다음으로, 최적의 시각화를 위해 돋보기 아래에서 췌장 머리에서 시작하여 간 척추의 뿌리까지 총 간동맥에 간동맥 결찰을 수행합니다. 젖은 거즈 면봉으로 중앙값과 왼쪽 엽의 등을 집어넣어 왼쪽 엽을 노출시킵니다. 그런 다음 멸균 메스 블레이드를 사용하여 왼쪽 엽에 약 2mm의 길이와 깊이의 절개를하고 즉시 멸균 겸자로 간 절개 부위에 종양 조각을 삽입합니다.
적절한 종양 이식과 지혈을 보장하기 위해 절개 부위에 6-0 나일론 봉합사를 사용하여 8자 봉합사를 적용하기 전에 종양을 간에 단단히 묻습니다. 그런 다음 중단 된 5-0 봉합사로 복부 절개를 닫습니다. 튜브에 18-FMISO의 분취량을 분주하고 멸균 식염수로 희석하여 100 마이크로 리터에서 18-20 메가 베크렐의 총 활성 농도를 보장합니다.
다음으로, 1 밀리리터 주사기로 용액을 뽑고 선량 교정기에 표시된 방사능과 시간을 기록하십시오. 피험자 마우스의 체중을 기록한 후, 준비된 방사성 추적자를 꼬리 정맥을 통해 조심스럽게 주입합니다. 붕괴 보정을 설명하려면 주사기의 주입 시간과 잔류 활성을 기록합니다.
PET 획득을 시작하려면 스카우트 보기를 수행하여 스캐너에서 마우스 위치를 찾습니다. 마우스 베드 위치를 조정하여 몸통 영역이 있는 전체 마우스 몸통이 시야의 중심에 오도록 합니다. 그런 다음 스터디 목록 창에서 PET 획득을 선택합니다. 스카우트 보기에서 미리 결정된 마우스 베드 위치를 사용하려면 이전 획득 시 스캔 범위를 선택합니다.
그런 다음 Prepare(준비)를 클릭하여 마우스 베드를 MR에서 PET로 자동으로 이동한 다음 Go(이동)를 클릭하여 수집을 시작합니다. Radiopharmaceutical Editor에서 적절한 방사성 뉴클레오티드를 선택하고 주입 용량 및 시간에 대한 세부 정보를 입력합니다. 또한 제목 정보 메뉴에서 마우스 무게를 입력합니다.
PET 스캔이 완료되면 Prepare(준비)를 선택하여 마우스를 PET에서 MR로 이동하고 Go(이동)를 클릭하여 MR 획득을 수행합니다. 모든 스캔이 완료되면 Table Out(테이블 출력)을 선택하여 이미징 베드를 기본 위치로 다시 이동합니다. 이 연구에 사용된 PET 영상은 간동맥 결찰술을 받은 마우스에서 18-FMISO의 종양 흡수가 증가했지만 대조군 마우스에서는 증가하지 않은 것으로 나타났습니다.
그러나, 당분해 마커 18F-FDG의 종양 흡수는 간동맥 결찰술이 있는 마우스와 없는 마우스에서 유사하였다. 이 표준화된 흡수 값 기반 접근법을 사용한 정량화는 대조군 마우스보다 간동맥 결찰이 있는 마우스의 종양에 의한 18-FMISO 흡수가 2.3배 더 높은 것으로 나타났습니다. 유사하게, 18-FMISO 흡수는 대조군 마우스의 간보다 간동맥 결찰을 가진 마우스의 간에서 더 높았다.
간동맥 결찰술은 또한 대조군 마우스보다 간동맥 결찰술을 받은 마우스의 종양 분비물에서 더 높은 수준의 저산소증 유발 인자 1-알파 발현에 의해 입증된 바와 같이 향상된 종양 저산소증을 초래했습니다. 18-FMISO PET 이미징 후, 저산소증 하에서 유도된 대사 유전자의 역할을 식별하기 위해 시퀀싱을 수행하여 새로운 치료 전략을 도출할 수 있습니다. 이 기술은 종양 저산소증을 정확하게 모니터링하는 데 사용할 수 있으므로 치료 효과를 신속하게 평가하고 HCC에서 저산소증 경로를 표적으로 하는 새로운 치료 전략을 만들 수 있습니다.
