تساعد هذه الطريقة في الإجابة عن كيفية امتصاص إيميداكلوبريد ونقله وتوزيعه في القمح. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي الحساسية العالية للكشف عن إيميداكلوبريد ، والتي يمكن استخدامها على نطاق واسع لتحديد إيميداكلوبريد في التربة والمياه والنبات والعينات الأخرى. لإنبات بذور القمح ، حدد 1000 بذرة مناسبة تحتوي على حبيبات كاملة وأجنة سليمة وحجم موحد.
اغمر البذور في محلول بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 10٪ لمدة 15 دقيقة لتطهير أسطحها. ثم شطف البذور خمس مرات عن طريق تشغيل الماء المعقم لمدة 10 ثوان في كل مرة. الآن ، انشر بذور القمح بالتساوي مع توجيه الأجنة لأعلى في طبق بتري زجاجي يحتوي على ورق ترشيح رطب ومعقم.
ضع طبق بتري في حاضنة مناخ اصطناعية يتم الحفاظ عليها عند 30 درجة مئوية و 80٪ رطوبة نسبية. استزرع بذور القمح في الظلام لمدة ثلاثة أيام حتى تنبت وتطور جذورها. بعد أن تنبت بذور القمح ، ضع 15 شتلة قمح في جهاز مائي يحتوي على 100 مل من نصف محلول مغذي Hoaglands.
بعد ذلك ، ضع الإعداد المائي بالكامل في حاضنة مناخ اصطناعية عند 25 درجة مئوية ورطوبة نسبية 80٪ لمدة سبعة أيام. لإعداد تجارب التعرض لمبيدات الآفات بتركيزين مختلفين من إيميداكلوبريد ، قم بإعداد أجهزة الزراعة المائية التي تحتوي على نصف محلول مغذي Hoaglands إما مع 0.5 ملليغرام لكل لتر أو خمسة ملليغرام لكل لتر من إيميداكلوبريد. قم بإعداد 15 جهازا مائيا لكل مجموعة تركيز إيميداكلوبريد لضمان أخذ عينات كافية أثناء أخذ العينات.
الآن ، زرع 15 نبتة قمح بعد فترة الزراعة المائية التي استمرت سبعة أيام في كل جهاز مائي معد. ضع الإعداد المائي بالكامل في حاضنة مناخ اصطناعية لمدة ثلاثة أيام عند 25 درجة مئوية ورطوبة نسبية 80٪. طوال فترة التعرض imidacloprid ، وجمع الجذور والأوراق من النباتات يوميا.
لكل تركيز إيميداكلوبريد ، قم بدمج عينات القمح من كل خمس أجهزة الزراعة المائية البالغ عددها 15 كمجموعة متوازية. لاستخراج إيميداكلوبريد من جذور القمح ، قم بتمزيق جذور القمح باستخدام المقص إلى قطع سنتيمتر واحد تقريبا. وزن 10 غرامات من جذور القمح تمزيقه ووضعها في أنبوب طرد مركزي 50 ملليلتر.
ثم أضف 10 ملليلتر من نتريل الأسيتيل إلى أنبوب الطرد المركزي ودوامة الأنبوب لمدة دقيقة واحدة قبل إضافة أربعة جرامات من كبريتات المغنيسيوم اللامائية و 1.5 جرام من كلوريد الصوديوم إلى الأنبوب. دوامة على الفور الأنبوب لمدة 30 ثانية. بعد ذلك ، قم بطرد الأنبوب عند 6،000 جم لمدة خمس دقائق.
نضح المادة الطافية بحقنة يمكن التخلص منها وتمريرها عبر مرشح حقنة 0.22 ميكرون للحصول على العينة. لاستخراج إيميداكلوبريد من أوراق القمح ، قم بتمزيق الأوراق الطازجة باستخدام المقص إلى قطع يبلغ طولها حوالي سنتيمتر واحد. تزن 10 غرامات من أوراق القمح المقطعة ووضعها في أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلتر.
أضف 10 ملليلتر من الأسيتونيتريل إلى 10 غرامات من أوراق القمح المبشورة في أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلتر ودوامة لمدة دقيقة واحدة. ثم عالج الخليط بكبريتات المغنيسيوم اللامائية وكلوريد الصوديوم وأجهزة الطرد المركزي كما هو موضح سابقا. لإزالة التصبغ والرطوبة من العينة ، خذ ملليلتر من المادة الطافية التي تم الحصول عليها بعد الطرد المركزي وأضفها إلى أنبوب طرد مركزي سعة خمسة ملليلتر يحتوي على أسود الكربون الجرافيتي وكبريتات المغنيسيوم اللامائية.
بعد 30 ثانية من خلط الدوامة ، قم بطرد الأنبوب عند 6،000 جم لمدة خمس دقائق ، متبوعا بشفط المادة الطافية بحقنة يمكن التخلص منها وتمريرها عبر مرشح حقنة 0.22 ميكرون للحصول على العينة. استخدم قياس الطيف الكتلي الترادفي للكروماتوغرافيا السائلة لتحديد كمية الإيميداكلوبريد من عينات القمح كما هو موضح في المخطوطة. أظهرت غلة استرداد الإيميداكلوبريد من عينات القمح أن متوسط استرداد إيميداكلوبريد من جذور القمح والأوراق المعرضة ل 0.5 ملليغرام لكل لتر من إيميداكلوبريد أو أقل مقارنة بمتوسط عمليات الاسترداد من العينات المعرضة لخمسة ملليغرام لكل لتر من إيميداكلوبريد.
تم اكتشاف إيميداكلوبريد في كل من جذور وأوراق نباتات القمح حتى بعد يوم واحد من التعرض ، مما يشير إلى امتصاصه السريع وتوصيله إلى النباتات. كان محتوى إيميداكلوبريد أعلى في اليوم الثالث من التعرض منه في اليوم الأول ، وكان تركيز إيميداكلوبريد أعلى باستمرار في الجذور منه في الأوراق. لم يلاحظ أي تثبيط واضح لنمو النبات ، حتى بعد ثلاثة أيام من التعرض للإيميداكلوبريد في النباتات المعرضة للإيميداكلوبريد مقارنة بالشواهد.
كان عامل تركيز الجذر ، أو RCF ، في العينات المعالجة أكبر من واحد ، مما يشير إلى أن القمح له تأثير تخصيب على إيميداكلوبريد. ومع ذلك ، كان عامل النقل ، أو TF ، للأوراق أقل من واحد ، مما يشير إلى أن المبيد لم ينتقل بسهولة من جذور القمح إلى الأوراق. أهم الخطوات هي استخراج وتنقية إيميداكلوبريد.
تأكد من استخراج إيميداكلوبريد دون خسارة خلال هذه الخطوات.
