Этот метод помогает ответить, как имидаклоприд поглощается, транспортируется и распределяется в пшенице. Основным преимуществом этого метода является высокая чувствительность обнаружения имидаклоприда, который может быть широко использован для определения имидаклоприда в почве, воде, растениях и других образцах. Чтобы прорастить семена пшеницы, выберите 1000 подходящих семян с полными гранулами, неповрежденными зародышами и однородным размером.
Погрузите семена в 10%-ный раствор перекиси водорода на 15 минут, чтобы обеззаразить их поверхности. Затем промойте семена пять раз, каждый раз пропуская стерильную воду в течение 10 секунд. Теперь равномерно распределите семена пшеницы зародышами вверх в стеклянной чашке Петри, содержащей влажную стерильную фильтровальную бумагу.
Поместите чашку Петри в инкубатор с искусственным климатом при температуре 30 градусов Цельсия и относительной влажности 80%. Культивируйте семена пшеницы в темноте в течение трех дней, пока они не прорастут и не разовьют корни. После того, как семена пшеницы прорастут, поместите 15 саженцев пшеницы в гидропонный аппарат, содержащий 100 миллилитров половины питательного раствора Hoaglands.
Затем поместите всю гидропонную установку в инкубатор с искусственным климатом при температуре 25 градусов по Цельсию и относительной влажности 80% в течение семи дней. Чтобы провести эксперименты по воздействию пестицидов с двумя разными концентрациями имидаклоприда, подготовьте гидропонные устройства, содержащие половину питательного раствора Hoaglands с содержанием 0,5 миллиграмма на литр или пяти миллиграммов на литр имидаклоприда. Установите 15 гидропонных устройств для каждой группы концентрации имидаклоприда, чтобы обеспечить адекватные образцы во время отбора проб.
Теперь пересадите 15 растений пшеницы после семидневного гидропонного периода в каждое подготовленное гидропонное устройство. Поместите всю гидропонную установку в инкубатор с искусственным климатом на три дня при температуре 25 градусов по Цельсию и относительной влажности 80%. В течение всего периода воздействия имидаклоприда ежедневно собирайте корни и листья растений.
Для каждой концентрации имидаклоприда интегрируйте образцы пшеницы из каждого пятого из 15 гидропонных устройств в параллельную группу. Чтобы извлечь имидаклоприд из корней пшеницы, измельчите корни пшеницы с помощью ножниц примерно на кусочки размером примерно один сантиметр. Взвесьте 10 граммов измельченных корней пшеницы и поместите их в центрифужную пробирку объемом 50 миллилитров.
Затем добавьте 10 миллилитров ацетилнитрила в пробирку центрифуги и вращайте пробирку в течение одной минуты, прежде чем добавить в пробирку четыре грамма безводного сульфата магния и 1,5 грамма хлорида натрия. Немедленно покрутите трубку в течение 30 секунд. Далее центрифугируют пробирку на 6 000 G в течение пяти минут.
Аспирируйте надосадочную жидкость одноразовым шприцем и пропустите ее через шприцевой фильтр 0,22 микрона, чтобы получить образец. Чтобы извлечь имидаклоприд из листьев пшеницы, измельчите свежие листья с помощью ножниц на кусочки размером примерно один сантиметр. Взвесьте 10 граммов измельченных листьев пшеницы и поместите их в центрифужную пробирку объемом 50 миллилитров.
Добавьте 10 миллилитров ацетонитрила к 10 граммам измельченных листьев пшеницы в 50-миллилитровой центрифужной пробирке и ворчите в течение одной минуты. Затем обработайте смесь безводным сульфатом магния и хлоридом натрия и центрифугой, как показано ранее. Чтобы удалить пигментацию и влагу из образца, возьмите два миллилитра надосадочной жидкости, полученной после центрифугирования, и добавьте ее в пятимиллилитровую центрифужную пробирку, содержащую графитированный технический углерод и безводный сульфат магния.
После 30 секунд вихревого перемешивания центрифугируют пробирку при 6 000 G в течение пяти минут, а затем аспирируют надосадочную жидкость одноразовым шприцем и пропускают ее через шприцевой фильтр 0,22 микрона для получения образца. Используйте тандемную масс-спектрометрию жидкостной хроматографии для количественного определения количества имидаклоприда из образцов пшеницы, как описано в рукописи. Восстановительные урожаи имидаклоприда из образцов пшеницы показали, что среднее восстановление имидаклоприда из корней и листьев пшеницы, подвергшихся воздействию 0,5 миллиграмма на литр имидаклоприда или меньше, по сравнению со средним восстановлением из образцов, подвергшихся воздействию пяти миллиграммов на литр имидаклоприда.
Имидаклоприд был обнаружен как в корнях, так и в листьях растений пшеницы даже после одного дня воздействия, что указывает на его быстрое поглощение и проводимость растениями. Содержание имидаклоприда было выше на третий день воздействия, чем в первый день, и концентрация имидаклоприда была неизменно выше в корнях, чем в листьях. Никакого явного ингибирования роста растений не наблюдалось даже после трех дней воздействия имидаклоприда на растения, подвергшиеся воздействию имидаклоприда, по сравнению с контрольной группой.
Фактор концентрации корней, или RCF, в обработанных образцах был больше единицы, что указывает на то, что пшеница оказывает обогащающее действие на имидаклоприд. Однако коэффициент транслокации, или TF, для листьев был меньше единицы, что позволяет предположить, что пестицид нелегко переносится с корней пшеницы на листья. Наиболее важными этапами являются экстракция и очистка имидаклоприда.
Убедитесь, что имидаклоприд извлекается без потерь во время этих шагов.
