Este método ajuda a responder como o imidaclopride é absorvido, transportado e distribuído no trigo. A principal vantagem desta técnica é a alta sensibilidade da detecção de imidacloprido, que pode ser amplamente utilizada para determinar imidaclopride em solo, água, planta e outras amostras. Para germinar as sementes de trigo, selecione 1000 sementes adequadas com grânulos completos, embriões intactos e tamanho uniforme.
Imergir as sementes em solução de peróxido de hidrogênio a 10% por 15 minutos para desinfetar suas superfícies. Em seguida, enxágue as sementes cinco vezes, passando água estéril por 10 segundos cada vez. Agora, espalhe as sementes de trigo uniformemente com os embriões apontando para cima em uma placa de Petri de vidro contendo papel de filtro úmido e estéril.
Coloque a placa de Petri em uma incubadora de clima artificial mantida a 30 graus Celsius e 80% de umidade relativa. Cultivar as sementes de trigo no escuro por três dias até germinar e desenvolver raízes. Após as sementes de trigo germinarem, colocar 15 mudas de trigo em um aparelho hidropônico contendo 100 mililitros de meia solução nutritiva Hoaglands.
Em seguida, coloque toda a instalação hidropônica em uma incubadora de clima artificial a 25 graus Celsius e 80% de umidade relativa por sete dias. Para montar os experimentos de exposição a pesticidas com duas concentrações diferentes de imidacloprido, prepare dispositivos hidropônicos contendo metade da solução nutritiva de Hoaglands com 0,5 miligramas por litro ou cinco miligramas por litro de imidacloprido. Configurar 15 dispositivos hidropónicos para cada grupo de concentração de imidaclopride para garantir amostras adequadas durante a amostragem.
Agora, transplante 15 plantas de trigo após seu período hidropônico de sete dias em cada dispositivo hidropônico preparado. Coloque toda a configuração hidropônica em uma incubadora de clima artificial por três dias a 25 graus Celsius e 80% de umidade relativa. Durante todo o período de exposição ao imidacloprido, colete raízes e folhas das plantas diariamente.
Para cada concentração de imidacloprido, integrar as amostras de trigo de cada quinto dos 15 dispositivos hidropônicos como um grupo paralelo. Para extrair o imidaclopride das raízes do trigo, triture as raízes do trigo usando uma tesoura em pedaços de aproximadamente um centímetro. Pese 10 gramas das raízes de trigo trituradas e coloque-as em um tubo de centrífuga de 50 mililitros.
Em seguida, adicione 10 mililitros de acetilnitrilo ao tubo da centrífuga e vomite o tubo por um minuto antes de adicionar quatro gramas de sulfato de magnésio anidro e 1,5 gramas de cloreto de sódio ao tubo. Vórtice imediatamente o tubo por 30 segundos. Em seguida, centrifugar o tubo a 6.000 G por cinco minutos.
Aspirar o sobrenadante com uma seringa descartável e passá-lo através de um filtro de seringa de 0,22 mícron para obter a amostra. Para extrair o imidaclopride das folhas de trigo, triture as folhas frescas usando uma tesoura em pedaços de aproximadamente um centímetro. Pese 10 gramas das folhas de trigo desfiadas e coloque-as em um tubo centrífugo de 50 mililitros.
Adicione 10 mililitros de acetonitrila a 10 gramas das folhas de trigo desfiadas em um tubo de centrífuga de 50 mililitros e vórtice por um minuto. Em seguida, trate a mistura com sulfato de magnésio anidro e cloreto de sódio e centrifugação como demonstrado anteriormente. Para remover a pigmentação e a umidade da amostra, pegue dois mililitros do sobrenadante obtido após a centrifugação e adicione-o a um tubo centrífugo de cinco mililitros contendo negro de fumo grafitizado e sulfato de magnésio anidro.
Após 30 segundos de mistura de vórtices, centrifugar o tubo a 6.000 G por cinco minutos, aspirando o sobrenadante com uma seringa descartável e passando-o através de um filtro de seringa de 0,22 mícron para obter a amostra. Use cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas para quantificar a quantidade de imidaclopride das amostras de trigo, conforme descrito no manuscrito. Os rendimentos de recuperação de imidaclopride de amostras de trigo mostraram que as recuperações médias de imidaclopride de raízes e folhas de trigo expostas a 0,5 miligramas por litro de imidaclopride ou menos em comparação com as recuperações médias de amostras expostas a cinco miligramas por litro de imidaclopride.
O imidaclopride foi detectado em raízes e folhas de plantas de trigo mesmo após um dia de exposição, indicando sua rápida absorbância e condutância para dentro das plantas. O teor de imidaclopride foi maior no terceiro dia de exposição do que no primeiro dia, e a concentração de imidaclopride foi consistentemente maior nas raízes do que nas folhas. Nenhuma inibição aparente do crescimento das plantas foi observada, mesmo após três dias de exposição ao imidaclopride em plantas expostas ao imidaclopride em comparação com os controles.
O fator de concentração radicular, ou RCF, nas amostras tratadas foi maior que um, indicando que o trigo tem efeito de enriquecimento sobre o imidaclopride. No entanto, o fator de translocação, ou FT, para as folhas foi menor que um, sugerindo que o pesticida não foi facilmente transferido das raízes do trigo para as folhas. As etapas mais importantes são a extração e purificação do imidaclopride.
Certifique-se de que o imidaclopride é extraído sem perda durante estas etapas.
