Este método ayuda a responder cómo se absorbe, transporta y distribuye el imidacloprid en el trigo. La principal ventaja de esta técnica es la alta sensibilidad de la detección de imidacloprid, que puede ser ampliamente utilizada para determinar imidacloprid en el suelo, agua, plantas y otras muestras. Para germinar las semillas de trigo, seleccione 1000 semillas adecuadas que tengan gránulos completos, embriones intactos y un tamaño uniforme.
Sumerja las semillas en una solución de peróxido de hidrógeno al 10% durante 15 minutos para desinfectar sus superficies. Luego enjuague las semillas cinco veces con agua estéril durante 10 segundos cada vez. Ahora, extienda las semillas de trigo uniformemente con los embriones apuntando hacia arriba en una placa de Petri de vidrio que contiene papel de filtro húmedo y estéril.
Coloque la placa de Petri en una incubadora de clima artificial mantenida a 30 grados centígrados y 80% de humedad relativa. Cultive las semillas de trigo en la oscuridad durante tres días hasta que germinen y desarrollen raíces. Después de que las semillas de trigo hayan germinado, coloque 15 plántulas de trigo en un aparato hidropónico que contenga 100 mililitros de la mitad de la solución nutritiva Hoaglands.
Luego, coloque toda la configuración hidropónica en una incubadora de clima artificial a 25 grados centígrados y 80% de humedad relativa durante siete días. Para establecer los experimentos de exposición a pesticidas con dos concentraciones diferentes de imidacloprid, prepare dispositivos hidropónicos que contengan la mitad de la solución nutritiva Hoaglands con 0.5 miligramos por litro o cinco miligramos por litro de imidacloprid. Configure 15 dispositivos hidropónicos para cada grupo de concentración de imidacloprid para garantizar muestras adecuadas durante el muestreo.
Ahora, trasplantar 15 plantas de trigo después de su período hidropónico de siete días en cada dispositivo hidropónico preparado. Coloque toda la configuración hidropónica en una incubadora de clima artificial durante tres días a 25 grados centígrados y 80% de humedad relativa. A lo largo del período de exposición al imidacloprid, recolecte raíces y hojas de las plantas diariamente.
Para cada concentración de imidacloprid, integrar las muestras de trigo de cada quinto de los 15 dispositivos hidropónicos como un grupo paralelo. Para extraer imidacloprid de las raíces de trigo, triture las raíces de trigo con tijeras en trozos de aproximadamente un centímetro. Pese 10 gramos de las raíces de trigo trituradas y colóquelas en un tubo de centrífuga de 50 mililitros.
Luego, agregue 10 mililitros de acetilnitrilo al tubo de centrífuga y vortex el tubo durante un minuto antes de agregar cuatro gramos de sulfato de magnesio anhidro y 1.5 gramos de cloruro de sodio al tubo. Inmediatamente vortex el tubo durante 30 segundos. A continuación, centrifugar el tubo a 6, 000 G durante cinco minutos.
Aspirar el sobrenadante con una jeringa desechable y pasarlo a través de un filtro de jeringa de 0,22 micras para obtener la muestra. Para extraer imidacloprid de las hojas de trigo, triture las hojas frescas con tijeras en trozos de aproximadamente un centímetro. Pese 10 gramos de las hojas de trigo trituradas y colóquelas en un tubo de centrífuga de 50 mililitros.
Agregue 10 mililitros de acetonitrilo a 10 gramos de las hojas de trigo trituradas en un tubo de centrífuga de 50 mililitros y vórtice durante un minuto. Luego trate la mezcla con sulfato de magnesio anhidro y cloruro de sodio, y centrifugar como se demostró anteriormente. Para eliminar la pigmentación y la humedad de la muestra, tome dos mililitros del sobrenadante obtenido después de la centrifugación y agréguelo a un tubo de centrífuga de cinco mililitros que contenga negro de humo grafitizado y sulfato de magnesio anhidro.
Después de 30 segundos de mezcla de vórtices, centrifugar el tubo a 6, 000 G durante cinco minutos, seguido de aspirar el sobrenadante con una jeringa desechable y pasarlo a través de un filtro de jeringa de 0,22 micras para obtener la muestra. Utilice cromatografía líquida y espectrometría de masas en tándem para cuantificar la cantidad de imidacloprid de las muestras de trigo como se describe en el manuscrito. Los rendimientos de recuperación de imidacloprid de muestras de trigo mostraron que las recuperaciones promedio de imidacloprid de raíces y hojas de trigo expuestas a 0.5 miligramos por litro de imidacloprid o menos en comparación con las recuperaciones promedio de muestras expuestas a cinco miligramos por litro de imidacloprid.
El imidacloprid se detectó tanto en las raíces como en las hojas de las plantas de trigo incluso después de un día de exposición, lo que indica su rápida absorbancia y conductancia en las plantas. El contenido de imidacloprid fue mayor en el tercer día de exposición que en el primer día, y la concentración de imidacloprid fue consistentemente mayor en las raíces que en las hojas. No se observó ninguna inhibición aparente del crecimiento de las plantas, incluso después de tres días de exposición al imidacloprid en las plantas expuestas al imidacloprid en comparación con los controles.
El factor de concentración de la raíz, o RCF, en las muestras tratadas fue mayor que uno, lo que indica que el trigo tiene un efecto de enriquecimiento sobre el imidacloprid. Sin embargo, el factor de translocación, o TF, para las hojas fue menor que uno, lo que sugiere que el pesticida no se transfirió fácilmente de las raíces de trigo a las hojas. Los pasos más importantes son la extracción y purificación del imidacloprid.
Asegúrese de que el imidacloprid se extrae sin pérdida durante estos pasos.
