이 방법은 이미다클로프리드가 밀에서 어떻게 흡수, 운반 및 분포되는지에 대한 답을 찾는 데 도움이 됩니다. 이 기술의 주요 장점은 토양, 물, 식물 및 기타 샘플에서 이미다클로프리드를 측정하는 데 널리 사용될 수 있는 이미다클로프리드 검출의 높은 감도입니다. 밀 종자를 발아시키려면 완전한 과립, 손상되지 않은 배아 및 균일한 크기를 가진 1000개의 적합한 종자를 선택하십시오.
씨앗을 10 % 과산화수소 용액에 15 분 동안 담그면 표면을 소독 할 수 있습니다. 그런 다음 매번 10 초 동안 멸균 된 물을 실행하여 씨앗을 5 번 헹굽니다. 이제 촉촉하고 멸균 된 여과지가 들어있는 유리 페트리 접시에 배아가 위로 향하게하여 밀 씨앗을 골고루 뿌립니다.
섭씨 30도, 상대 습도 80%로 유지되는 인공 기후 인큐베이터에 페트리 접시를 놓습니다. 밀 씨앗이 발아하고 뿌리가 생길 때까지 3 일 동안 어둠 속에서 배양하십시오. 밀 씨앗이 발아 한 후, 15 밀리리터의 반 Hoaglands 영양 용액이 들어있는 수경 재배 장치에 100 밀 묘목을 넣으십시오.
그런 다음 전체 수경 재배 환경을 섭씨 25도, 상대 습도 80%의 인공 기후 인큐베이터에 7일 동안 둡니다. 두 가지 다른 이미다클로프리드 농도로 살충제 노출 실험을 설정하려면 이미다클로프리드 리터당 0.5밀리그램 또는 이미다클로프리드 리터당 5밀리그램의 Hoaglands 영양소 용액 절반을 포함하는 수경 재배 장치를 준비하십시오. 샘플링 중에 적절한 샘플을 보장하기 위해 각 imidacloprid 농도 그룹에 대해 15개의 수경 재배 장치를 설정합니다.
이제 15 개의 밀 식물을 7 일간의 수경 재배 기간을 각 준비된 수경 재배 장치에 이식합니다. 전체 수경 재배 설비를 섭씨 25도 및 상대 습도 80%에서 3일 동안 인공 기후 인큐베이터에 넣습니다. imidacloprid 노출 기간 동안 매일 식물에서 뿌리와 잎을 수집하십시오.
각 이미다클로프리드 농도에 대해, 15개의 수경재배 장치 중 매 5분의 1의 밀 샘플을 병렬 그룹으로 통합합니다. 밀 뿌리에서 이미다클로프리드를 추출하려면 가위를 사용하여 밀 뿌리를 약 1cm 조각으로 잘게 썬다. 잘게 썬 밀 뿌리 10g의 무게를 달아 50 밀리리터 원심 분리기 튜브에 넣습니다.
그런 다음 10 밀리리터의 아세틸 니트릴을 원심 분리기 튜브에 넣고 튜브를 1 분 동안 소용돌이 치고 4 그램의 무수 황산 마그네슘과 1.5 그램의 염화나트륨을 튜브에 첨가합니다. 즉시 튜브를 30초 동안 소용돌이칩니다. 다음으로, 튜브를 6, 000 G에서 5 분 동안 원심 분리한다.
일회용 주사기로 상층액을 흡인하고 0.22미크론 주사기 필터에 통과시켜 샘플을 얻습니다. 밀 잎에서 이미다클로프리드를 추출하려면 가위를 사용하여 신선한 잎을 약 1센티미터의 조각으로 잘게 썬다. 잘게 썬 밀 잎 10g의 무게를 달아 50밀리리터 원심분리기 튜브에 넣습니다.
10밀리리터 원심분리기 튜브에 파쇄된 밀잎 10g에 50밀리리터의 아세토니트릴을 넣고 1분 동안 소용돌이칩니다. 그런 다음 혼합물을 무수 황산마그네슘과 염화나트륨으로 처리하고 이전에 설명한 대로 원심분리합니다. 샘플에서 색소 침착과 수분을 제거하려면 원심 분리 후 얻은 상청액 2 밀리리터를 취하여 흑연 화 카본 블랙과 무수 황산 마그네슘이 들어있는 5 밀리리터 원심 분리기 튜브에 첨가하십시오.
와류 혼합 30 초 후, 튜브를 6, 000 G에서 5 분 동안 원심 분리하고, 일회용 주사기로 상청액을 흡인하고 0.22 미크론 주사기 필터를 통과시켜 샘플을 얻는다. 액체 크로마토그래피 탠덤 질량 분석법을 사용하여 원고에 설명된 대로 밀 샘플에서 이미다클로프리드의 양을 정량화합니다. 밀 샘플에서 이미다클로프리드의 회수 수율은 이미다클로프리드 리터당 5밀리그램에 노출된 샘플로부터의 평균 회수율과 비교하여 이미다클로프리드 리터당 0.5밀리그램 이하에 노출된 밀 뿌리 및 잎으로부터의 평균 이미다클로프리드 회수율을 보여주었다.
이미다클로프리드는 노출 하루 후에도 밀 식물의 뿌리와 잎 모두에서 검출되어 식물에 대한 빠른 흡광도와 전도도를 나타냅니다. 이미다클로프리드 함량은 노출 3일째에 1일차보다 더 높았고, 이미다클로프리드 농도는 잎보다 뿌리에서 일관되게 더 높았다. 대조군과 비교하여 이미다클로프리드에 노출된 식물에서 이미다클로프리드에 3일 동안 노출된 후에도 식물 성장의 명백한 억제는 관찰되지 않았습니다.
처리된 샘플의 뿌리 농도 인자(RCF)는 1보다 컸으며, 이는 밀이 이미다클로프리드에 대한 농축 효과가 있음을 나타냅니다. 그러나 잎에 대한 전위 인자(TF)는 1 미만이었고, 이는 살충제가 밀 뿌리에서 잎으로 쉽게 옮겨지지 않았음을 시사합니다. 가장 중요한 단계는 이미다클로프리드의 추출 및 정제입니다.
이 단계에서 이미다클로프리드가 손실 없이 추출되었는지 확인합니다.
