نموذج ما بعد الاستئصال لانتكاس الورم الأرومي الدبقي لفحوصات الهيدروجيل العلاجية

تكرار الورم هو سبب رئيسي لفشل نظام الاستئصال الجراحي ل GBM. يوفر بروتوكولنا نموذجا فريدا لتكرار GBM لدراسات العلاج المحلية الفعالة للانتكاس ، بعد البحث. توفر هذه التقنية طريقة ملائمة ومجدية لبناء نموذج الانتكاس بعد استئصال GBM ، ويمكن استخدامها في دراسات مختلفة حول انتكاس GBM.

ابدأ بإعداد الحيوان. قطع فروة رأس الفأر حوالي سنتيمتر واحد على طول خط الوسط على الجبهة اليمنى مع مقص العيون. قم بضبط الجهاز التجسيمي للتأكد من أن التماس متعرجة ونقطة اليافوخ الأمامية تقع في نفس المستوى.

باستخدام قطعة قطن مغموسة في البنفسج الجنيان ، حدد نقطة عند ملليمتر واحد إلى الأمام ، و 1.8 ملم إلى اليمين ، وثلاثة ملليمترات لأسفل من اليافوخ الأمامي. حفر النقطة باستخدام حفر الجمجمة مصغرة من قطر ملليمتر واحد. قم بإنشاء مسام يبلغ قطرها حوالي ملليمتر واحد وعمق ملليمتر واحد.

قم بإزالة السائل الشوكي الدماغي المنضح بقطعة قطن معقمة. بعد ذلك ، نضح خمسة ميكرولتر من تعليق الخلايا السرطانية باستخدام حقنة مجهرية. قم بمحاذاة طرف إبرة المحقنة الدقيقة عموديا مع فتحة حفر الجمجمة وأدخلها حتى يدخل طرف الإبرة إلى مستوى الجمجمة لمدة ثلاثة ملليمترات.

ثم اسحب الإبرة بمقدار 0.5 ملم. افتح المحقنة الدقيقة وحقن المحلول بسرعة ميكرولتر واحد في الدقيقة. احتفظ بالإبرة لمدة 10 دقائق بعد الحقن.

ثم اسحب المحقنة الدقيقة ببطء واضغط على نقطة الحقن باستخدام كرة قطنية معقمة وجافة. خياطة فروة الرأس بخياطة جراحية غير قابلة للامتصاص 10-0 وتطهير الشق. مراقبة صحة الحيوان والحفاظ عليه في ظروف دافئة.

بعد استيقاظ الماوس ، أعده إلى قفص السكن. بعد 10 أيام من حمل الورم ، اكتشف الورم المزروع. لهذا ، قم بحقن الماوس داخل الصفاق بفلوريسئين البوتاسيوم ، وبعد 11 ثانية ، قم بتصوير الماوس بنظام تصوير حيوي في الجسم الحي.

افصل أنسجة فروة الرأس والجمجمة وتحقق من ثقب الحفر المستخدم لبناء نموذج GBM داخل الجمجمة التقويمي. إذا التئمت الحفرة ، فحدد الثقب باستخدام جهاز التجسيم وحفر الحفرة كما هو موضح من قبل. قم بتوسيع القطر بالكامل إلى خمسة ملليمترات باستخدام مثقاب الجمجمة وإزالة السائل الشوكي الدماغي المنضح بقطعة قطن معقمة.

ركز المجهر على رأس الماوس واضبط الإعدادات للتأكد من وجود فتحة الحفر في مركز مجال الرؤية. قطع السحايا بالمقص المجهري. ثم قم بإزالة جزء من أنسجة الورم باستخدام ميكروكوريت ومشرط دقيق تحت المجهر.

وقف النزيف مع الشاش المعقم وغسل الحقن مع المياه المالحة الفسيولوجية المعقمة. باستخدام حقنة سعة ملليلتر واحد ، قم بحقن 10 ميكرولتر من الهيدروجيل المتاح تجاريا في تجويف الاستئصال. باستخدام هذا البروتوكول ، تم زرع خلايا GBM في دماغ الفئران وتم اختبار نمو الورم بواسطة التصوير الحيوي في الجسم الحي في اليوم 10.

تم إجراء الاستئصال وحقن هيدروجيل في اليوم 11. كان حجم الأورام في نموذج GBM للانتكاس بعد الاستئصال أصغر بكثير من تلك الموجودة في نموذج GBM داخل الجمجمة التقويمي. أظهرت مراقبة نمو الورم المتبقي في اليوم 25 تكرار الأورام.

أكد تلطيخ H& E أن نموذج الانتكاس بعد الاستئصال GBM قد تم بناؤه بنجاح وأن الأورام المتبقية تكررت بشكل كبير بعد الاستئصال. أهم شيء يجب تذكره في هذا الإجراء هو قطع السحايا وإزالة جزء من أنسجة الورم تحت المجهر.