Рецидив опухоли является основной причиной неэффективности режима хирургической резекции ГБМ. Наш протокол предоставляет уникальную модель рецидива ГБМ для эффективных локальных исследований рецидива после исследования. Этот метод обеспечивает удобный и осуществимый метод построения пострезекционной модели рецидива ГБМ и может быть использован в различных исследованиях рецидива ГБМ.
Начните с подготовки животного. Разрежьте офтальмологическими ножницами кожу головы мыши примерно на один сантиметр по средней линии на правом лбу. Настройте стереотаксический аппарат так, чтобы шов «елочка» и точка переднего родничка располагались на одном уровне.
С помощью ватного тампона, смоченного в фиалке гении, отметьте точку на один миллиметр спереди, на 1,8 миллиметра справа и на три миллиметра вниз от переднего родничка. Просверлите острие с помощью мини-краниального сверла диаметром один миллиметр. Создайте пору диаметром около одного миллиметра и глубиной один миллиметр.
Удалить экссудированную спинномозговую жидкость стерильным ватным тампоном. Далее микрошприцем аспирируют пять микролитров суспензии опухолевых клеток. Совместите кончик иглы микрошприца вертикально с отверстием для сверления черепа и вводите до тех пор, пока кончик иглы не войдет в плоскость черепа на три миллиметра.
Затем втяните иглу на 0,5 миллиметра. Откройте микрошприц и введите раствор со скоростью один микролитр в минуту. Держите иглу в течение 10 минут после инъекции.
Затем медленно извлеките микрошприц и прижмите место инъекции стерильным сухим ватным тампоном. Зашить волосистую часть головы нерассасывающимся хирургическим шовным материалом 10-0 и продезинфицировать разрез. Следите за здоровьем животного и держите его в теплых условиях.
После того, как мышь проснется, переместите ее обратно в клетку корпуса. Через 10 дней после вынашивания опухоли обнаружить трансплантированную опухоль. Для этого введите мыши внутрибрюшинно флуоресцеин калия, а через 11 секунд визуализируйте мышь с помощью биолюминесцентной системы визуализации in vivo.
Отделите ткани волосистой части головы и черепа и проверьте отверстие, используемое для построения ортотопической внутричерепной модели GBM. Если отверстие зажило, определите отверстие с помощью стереотаксического аппарата и просверлите отверстие, как показано выше. Увеличьте весь диаметр до пяти миллиметров с помощью сверла для черепа и удалите выделяемую спинномозговую жидкость стерильным ватным тампоном.
Сфокусируйте микроскоп на головке мыши и отрегулируйте настройки так, чтобы отверстие для сверления находилось в центре поля зрения. Вырежьте мозговые оболочки микроножницами. Затем удаляют часть опухолевой ткани микрокюреткой и микроскальпелем под микроскопом.
Остановите кровотечение стерильной марлей и промойте укол стерильным физиологическим раствором. С помощью шприца объемом один миллилитр введите в полость резекции 10 микролитров имеющегося в продаже гидрогеля. Используя этот протокол, клетки GBM были имплантированы в мозг мышей, и рост опухоли был проверен с помощью биолюминесцентной визуализации in vivo на 10-й день.
Резекция и инъекция гидрогеля были выполнены на 11-е сутки. Размер опухолей в пострезекционной модели ГБМ был значительно меньше, чем в ортотопической внутричерепной модели ГБМ. Наблюдение за остаточным ростом опухоли на 25-е сутки показало рецидив опухолей.
Окрашивание H&E подтвердило, что модель рецидива GBM после резекции была построена успешно, и что остаточные опухоли значительно рецидивировали после резекции. Самое главное, что нужно помнить при этой процедуре – это разрезать мозговые оболочки и удалить часть опухолевой ткани под микроскопом.
