Tümör nüksü, GBM'nin cerrahi rezeksiyonunun rejim başarısızlığının önemli bir nedenidir. Protokolümüz, araştırma sonrası nüksün etkili lokal tedavi çalışmaları için benzersiz bir GBM nüks modeli sağlar. Bu teknik, GBM nüks sonrası rezeksiyon modelini oluşturmak için uygun ve uygulanabilir bir yöntem sağlar ve GBM nüksü ile ilgili çeşitli çalışmalarda kullanılabilir.
Hayvanı hazırlayarak başlayın. Farenin kafa derisini sağ alnındaki orta çizgi boyunca oftalmik makasla yaklaşık bir santimetre kesin. Balıksırtı dikişinin ve ön bıngıldak noktasının aynı seviyede olduğundan emin olmak için stereotaksik aparatı ayarlayın.
Genian violet'e batırılmış bir pamuklu çubuk kullanarak, öne bir milimetre, sağa 1,8 milimetre ve ön bıngıldağdan üç milimetre aşağıya bir nokta işaretleyin. Bir milimetre çapında bir mini kraniyal matkap kullanarak noktayı delin. Yaklaşık bir milimetre çapında ve bir milimetre derinliğinde bir gözenek oluşturun.
Sızan beyin omurilik sıvısını steril bir pamuklu çubukla çıkarın. Daha sonra, bir mikroşırınga ile beş mikrolitre tümör hücresi süspansiyonunu aspire edin. Mikroşırınganın iğne ucunu kafatası delme deliği ile dikey olarak hizalayın ve iğne ucu kafatası düzlemine üç milimetre girene kadar yerleştirin.
Ardından iğneyi 0,5 milimetre geri çekin. Mikroşırıngayı açın ve çözeltiyi dakikada bir mikrolitre hızla enjekte edin. Enjeksiyondan sonra iğneyi 10 dakika tutun.
Ardından, mikroşırıngayı yavaşça çekin ve enjeksiyon noktasına steril, kuru bir pamuk topuyla bastırın. Saç derisini emilmeyen 10-0 cerrahi sütür ile dikin ve kesiyi dezenfekte edin. Hayvanın sağlığını izleyin ve sıcak koşullarda tutun.
Fare uyandıktan sonra, muhafaza kafesine geri götürün. Tümör taşındıktan 10 gün sonra, nakledilen tümörü tespit edin. Bunun için fareye intraperitoneal olarak potasyum floresein enjekte edin ve 11 saniye sonra fareyi in vivo biyolüminesan görüntüleme sistemi ile görüntüleyin.
Kafa derisi dokusunu ve kafatasını ayırın ve ortotopik intrakraniyal GBM modelini oluşturmak için kullanılan delme deliğini kontrol edin. Delik iyileştiyse, stereotaktik aparat kullanarak deliği tanımlayın ve deliği daha önce gösterildiği gibi delin. Bir kafatası matkabı ile tüm çapı beş milimetreye genişletin ve sızan beyin omurilik sıvısını steril bir pamuklu çubukla çıkarın.
Mikroskobu farenin başına odaklayın ve delme deliğinin görüş alanının merkezinde olduğundan emin olmak için ayarları yapın. Meninksleri mikro makasla kesin. Daha sonra, mikroskop altında bir mikroküret ve mikroneşter ile tümör dokusunun bir kısmını çıkarın.
Kanamayı steril gazlı bezle durdurun ve enjeksiyonu steril fizyolojik salinle yıkayın. Bir mililitrelik bir şırınga kullanarak, piyasada bulunan hidrojelden 10 mikrolitre rezeksiyon boşluğuna enjekte edin. Bu protokol kullanılarak, GBM hücreleri farelerin beynine implante edildi ve tümör büyümesi 10. günde in vivo biyolüminesan görüntüleme ile test edildi.
Rezeksiyon ve hidrojel enjeksiyonu 11. günde yapıldı. GBM relaps sonrası rezeksiyon modelindeki tümörlerin boyutu, ortotopik intrakraniyal GBM modelindekilerden anlamlı olarak daha küçüktü. 25. günde rezidüel tümör büyümesinin izlenmesi, tümörlerin nüksettiğini gösterdi.
H&E boyama, GBM relaps sonrası rezeksiyon modelinin başarılı bir şekilde oluşturulduğunu ve rezeksiyondan sonra rezidüel tümörlerin önemli ölçüde nüks ettiğini doğruladı. Bu işlemde hatırlanması gereken en önemli şey, beyin zarlarının kesilmesi ve tümör dokusunun bir kısmının mikroskop altında çıkarılmasıdır.
