توليد خطوط خلايا خروج المغلوب المرتبطة بالسنترومير Protein-E CENP-E^-/- باستخدام نظام كريسبر / كاس 9

عادة ما يؤدي الحذف الجيني ل Kinesin-7 و CENP إلى توقف دورة الخلية وموت الخلايا. يعد بناء خطوط خلايا CENP المستقرة قضية مهمة لم يتم حلها في بيولوجيا CENP. في هذه الدراسة ، قمنا بإنشاء خلايا HELA بالضربة القاضية CENP باستخدام نظام CRISPR / Cas9 ، وأنشأنا ثلاث استراتيجيات فحص محسنة.

في الآونة الأخيرة ، تم تصميم العديد من تقنيات تحرير الجينوم ، بما في ذلك نوكلياز إصبع الزنك ، والنوكليازات المستجيبة الشبيهة بمنشط النسخ ، وكيف نصنع النيوكليازات الخاصة بنا ، لشق الجينومات بحجم معين. أحدثت تقنية الضربة القاضية الجينية CRISPR / Cas9 ثورة في علم الأحياء الأساسي والتكنولوجيا الحيوية والطب. CENP ضروري لربط الحركية بالأنابيب الدقيقة ومحاذاة الكروموسومات.

يؤدي تعطيل CENP ، سواء من خلال الحقن المجهري للأجسام المضادة ، أو حذف sgRNA ، أو التثبيط الكيميائي ، أو الحذف الجيني ، إلى اختلال محاذاة الكروموسومات ، والعيوب الانقسامية ، وغالبا موت الخلايا ، مما يعقد دراسة آليات بروتين CENP. في هذه الدراسة ، تم إنشاء ثلاث استراتيجيات فحص محسنة قائمة على النمط الظاهري ، بما في ذلك فحص مستعمرة الخلايا ، ومحاذاة الكروموسومات للأنماط الظاهرية ، وكثافة الفلورسنت لبروتينات CENP ، مما أدى إلى تحسين كفاءة الفحص ومعدل النجاح التجريبي. الأهم من ذلك ، يؤدي حذف CENP إلى اختلال الكروموسوم ، والموقع غير الطبيعي لبروتينات BubR1 ، والعيوب الانقسامية.

تعد أنماط التفاعل والآليات الجزيئية ل CENP ومثبطاته مجالات بحثية مهمة في بيولوجيا الخلية وأبحاث السرطان. في هذه الدراسة ، تم إنشاء خط خلايا HeLa بالضربة القاضية CENP كأداة قيمة للتحقق من خصوصية وسمية مثبطات CENP.