عزل وزراعة وتوصيف الخلايا الجذعية لب الأسنان من الأسنان اللبنية والدائمة البشرية

ابدأ بتأمين السن البشري المستخرج في مكانه باستخدام ملقط الأسنان. ثم قم بقص السن باستخدام قرص ماسي متصل بقبضة أسنان ومبرد ماء. باستخدام حفارة الأسنان ، قم بإزالة أنسجة اللب من السن.

بعد ذلك ، استخدم شفرة جراحية معقمة لفرم أنسجة اللب بعناية إلى شظايا صغيرة. ثم ضع هذه الشظايا في مطحنة أنسجة صغيرة مع برنامج تلفزيوني لتشكيل خليط متجانس. نقل شظايا الأنسجة المفرومة إلى أنبوب 15 ملليلتر وهضمها باستخدام مزيج من كولاجيناز النوع الأول وتفكيكها.

احتضان الأنسجة في خليط الإنزيم عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين. بعد الحضانة ، تحييد الإنزيمات. بعد ذلك ، انقل الأنسجة المهضومة إلى أنبوب سعة 15 ملليلتر وتدور عند 300 جم لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.

ثم تخلص من المادة الطافية بعناية وأعد تعليق الحبيبات في DMEM طازجة ، مكملة ب 10 إلى 20٪ FBS. لزراعة الخلايا ، انقل تعليق الخلية بعناية إلى دورق ثقافة 25 سم مربع. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية في 5 ٪ ثاني أكسيد الكربون.

بعد يومين إلى ثلاثة أيام ، باستخدام ماصة مصلية معقمة ، قم باستنشاق الوسط بعناية واستبدله بوسط جديد. بعد ذلك ، لتوصيف DPSCs ، قم بتشغيل مقياس التدفق الخلوي وتأكد من طبيعة الخلايا الجذعية الوسيطة للخلايا المعزولة. إن التمايز الناجح ل DPSCs إلى بانيات العظم والخلايا الشحمية والخلايا الغضروفية يتحقق من صحة الطبيعة متعددة القدرات ل DPSCs.

كان وقت مضاعفة DPSCs متسقا مع ذلك المبلغ عنه للخلايا الجذعية الوسيطة ، مما يشير إلى وجود خلايا صحية وتكاثرية. أظهر تحليل قياس التدفق الخلوي أن غالبية DPSCs كانت إيجابية ل CD-90 و CD-73 و CD-105 ، مما يؤكد هويتها كخلايا جذعية وسيطة. علاوة على ذلك ، كان أقل من 2٪ من الخلايا إيجابيا ل CD-34 و CD-45 و HLADR ، مما يؤكد عدم وجود تلوث كبير للخلايا المكونة للدم أو البطانية.