عزل النواقل الفيروسية المرتبطة بالغدي من خلال بروتوكول كروماتوغرافيا تقارب الهيبارين أحادي الخطوة وشبه آلي

في هذا العمل ، نعتزم تطوير بروتوكول محسن لإنتاج وتنقية وتوصيف النواقل الفيروسية المرتبطة بالفسيفساء الغدية التي يمكن أن تثبت قيمتها في الدراسات قبل السريرية. على الرغم من الجهود المبذولة لإنشاء خطوط خلايا منتجة مستقرة ، لا يزال النقل العابر في خلايا الثدييات هو سير العمل السائد لإنتاج AAV. ثم يتم تنقية AAVs عن طريق الطرد المركزي المتدرج عالي السرعة ، أو عن طريق تقنيات الكروماتوغرافيا التي تعتمد على الخصائص الكيميائية الحيوية للجزيئات الفيروسية.

تستخدم الطرق الشائعة الاستخدام لتنقية AAVs كلوريد السيزيوم ، أو الطرد المركزي الفائق لتدرج كثافة اليوديكسانول. على الرغم من مزاياها ، لديهم بعض القيود. إنها تستغرق وقتا طويلا ، ولديها قابلية محدودة للتوسع ، وغالبا ما تعطي نتائج لبعض النواقل ذات النقاء المنخفض.

الآن ، للتغلب على هذه القيود ، حول العديد من الباحثين انتباههم إلى تقنيات الكروماتوغرافيا. وصفنا بروتوكولا خطوة بخطوة لتوليد rAAVs الفسيفساء بناء على قدرة ربط الهيبارين ل AAV2. تجعل هذه الطريقة rAAVs عالية النقاء والنشطة بيولوجيا جاهزة للاستخدام في غضون ستة أيام ، وتقدم نفسها كاستراتيجية شبه آلية وقابلة للتطوير وفعالة من حيث التكلفة لتوليد rAAVs للدراسات قبل السريرية.

بعد إثبات قابلية تطبيق هذه الطريقة لتوليد rAAVs الفسيفسائية ، يمكن الآن ضبط نظام الإنتاج لتحقيق قابلية أفضل للتوسع وفعالية التكلفة من خلال إنشاء خط خلية منتج. بالإضافة إلى ذلك ، نهدف إلى إزالة الجسيمات الفارغة من خلال تضمين خطوة تنقية تلميع ثانية.