בידוד של וקטורים נגיפיים הקשורים לאדנו באמצעות פרוטוקול כרומטוגרפיית זיקה הפרין חד-שלבי וחצי אוטומטי

בעבודה זו, בכוונתנו לפתח פרוטוקול משופר לייצור, טיהור ואפיון של וקטורים נגיפיים הקשורים לפסיפס אדנו שיוכלו להוכיח את ערכם במחקרים פרה-קליניים. למרות המאמצים לבסס קווי תאי יצרן יציבים, טרנספקציה חולפת בתאי יונקים היא עדיין זרימת העבודה העיקרית לייצור AAV. לאחר מכן ה-AAV מטוהרים על ידי צנטריפוגה הדרגתית בצפיפות אולטרה-גבוהה, או על ידי טכניקות כרומטוגרפיה המסתמכות על התכונות הביוכימיות של חלקיקים נגיפיים.

השיטות הנפוצות לטיהור AAVs עושות שימוש בצזיום כלוריד, או אולטרה-צנטריפוגה הדרגתית של צפיפות יודיקסנול. למרות היתרונות שלהם, יש להם כמה מגבלות. הם גוזלים זמן, יש להם מדרגיות מוגבלת, והם לעתים קרובות נותנים תוצאות כמה וקטורים עם טוהר נמוך.

כעת, כדי להתגבר על אילוצים אלה, כמה חוקרים הפנו את תשומת לבם לטכניקות כרומטוגרפיה. אנו מתארים פרוטוקול שלב אחר שלב ליצירת rAAV פסיפס המבוסס על יכולת קשירת הפרין של AAV2. שיטה זו הופכת rAAV טהורים מאוד ופעילים ביולוגית מוכנים לשימוש תוך שישה ימים, ומציגה את עצמה כאסטרטגיה חצי אוטומטית, ניתנת להרחבה וחסכונית ליצירת rAAV למחקרים פרה-קליניים.

לאחר שהוכיח את הישימות של שיטה זו לייצור rAAV פסיפס, כעת ניתן לכוונן את מערכת הייצור כדי להשיג מדרגיות טובה יותר וחסכוניות יותר על ידי הקמת קו תאי יצרן. בנוסף, אנו שואפים להסיר חלקיקים ריקים על ידי הכללת שלב טיהור ליטוש שני.