単一分子相関力および蛍光顕微鏡法のためのIn Situヌクレオソームアセンブリ

単一分子技術は、クロマチン系の力学、配位、組成を研究するための強力なツールです。したがって、研究者は常にヌクレオソーム基質を生成するためのより良い方法を探しています。ここでは、単一分子相関力および蛍光顕微鏡でC2のDNA上にヌクレオソームを形成するプロトコルについて説明します。

通常、ヌクレオソーム基質は、塩透析によって強力なポジショニング配列を含むDNA上にヌクレオソームを組み立てることによって作られます。これには利点がありますが、人工的に安定したヌクレオソームを生成し、試薬の扱いが重いです。私たちのプロトコルは、特定のDNA配列を使用せずに、はるかに少ない試薬で、単分子相関力顕微鏡および蛍光顕微鏡法用のヌクレオソーム基質を数分で調製します。

このプロトコールにより、ネイティブDNA配列上のヌクレオソームアセンブリ、ヌクレオソーム密度の容易な調整、および試薬の調製時間と使用の短縮が可能になります。さらに、C2でのヌクレオソームDNAテザーの形成により、実験ワークフローが簡素化され、組み込まれた1分子の可視化と操作の利便性が向上します。均一で特異的なヌクレオソームの位置決めが実験の本質的な部分ではない場合、私たちの発見は、科学者が単一分子レベルでクロマチンとそのマイニングタンパク質をより効率的に研究するのに役立ちます。

時間とリソースが節約されたため、追加の変数や条件をさらに調査するために、より多くの実験を行うことができます。現在考えている応用可能な研究分野には、ヒストン変異体によって制御されるクロマチン力学やその他の翻訳後修飾が含まれます。また、他のクロマチン結合タンパク質の生物物理学的関与と動力学についても考えています。

そして最後に、生体分子縮合などのヌクレオソーム駆動の高次アセンブリプロセスについても考えています。