单分子技术是研究染色质系统的力学、协调和组成的强大工具。因此,研究人员一直在寻找更好的方法来生成核小体底物。在这里,我们描述了一种在单分子相关力和荧光显微镜下在 C2 中跨 DNA 形成核小体的方案。
通常,核小体底物是通过盐透析将核小体组装到含有强定位序列的 DNA 上来制备的。虽然这有优点,但它会产生人工稳定的核小体,并且对试剂要求很高。我们的方案在几分钟内为单分子相关力和荧光显微镜制备核小体底物,无需特定的 DNA 序列,并且试剂少得多。
该方案能够在天然 DNA 序列上进行核小体组装,轻松调整核小体密度,以及减少制备时间和试剂的使用。此外,在 C2 中形成核小体 DNA 系绳使实验工作流程更简单,并具有内置单分子可视化和操作的便利性。当均匀和特异性的核小体定位不是实验的重要组成部分时,我们的研究结果可以帮助科学家更有效地在单分子水平上研究染色质及其挖掘蛋白。
通过节省时间和资源,可以进行更多实验以进一步研究其他变量和条件。我们目前正在考虑的适用研究领域包括受组蛋白变体和其他翻译后修饰调节的染色质机制。我们还在考虑其他染色质结合蛋白的生物物理参与和动力学。
最后,我们还在考虑核小体驱动的高阶组装过程,例如生物分子缩合。