从整个成年果蝇大脑细胞记录

摘要

这个视频演示隔离准备从单个神经元，使用标准的全细胞技术记录整个大脑在成年果蝇的过程。它包括绿色荧光标记的细胞和神经元在录制过程中查看的图像。

摘要

在这段视频中，我们展示了整个隔离准备从单个神经元记录在成年果蝇大脑的过程。我们首先通过描述的解剖解决方案，并在我们的研究中所使用的成年女性的捕获。删除整个大脑完好，包括视叶，程序说明。也显示夹层覆气管。孤立的大脑不仅是小的，但需要特殊照顾，在此阶段处理，以防止损坏的神经元，其中有许多是接近外表面的组织。我们展示了如何使用我们开发的是一个特殊的人来稳定大脑中的录音室。设置一个标准的电是从单个神经元或神经元对的记录。一个荧光图像，通过录音显微镜观看，从GAL4推动GFP的表达（GH146）说明了如何确定在活的大脑投射神经元（PNS）。高功率Nomarski图像显示了正在有针对性的全细胞记录单个神经元。当大脑无损伤成功拆除，大多数神经元的自发活动，发射动作电位和/或参展自发突触输入。在现场准备，确定在整个大脑的神经元的全细胞记录可与遗传和药理操作相结合，这是一个有益的模式探索在成人中枢神经系统的细胞生理学和可塑性。

研究方案

一，剖析大脑成人飞

1. 解剖解决方案中心在35毫米培养皿中放置一个小滴（约100μL）。
2. 捕获的成年女性使用吸引器。在解剖显微镜下，用两个注射器针头杀头飞。
3. 将头部的解剖生理盐水的小水滴在培养皿（用木瓜蛋白酶添加）。
4. 头的位置与面临的菜底部的长鼻。
5. 保持角质层覆盖针1左复眼。做一个对角线切割背侧延伸到了2针，只是内侧针1腹面。
6. 与针1次举行的口器和使用针2水平的削减延伸，从左眼腹面右眼长鼻基地的水平，。
7. 按住针1对复眼的角质层覆盖。做一个对角线切割背侧延伸到了2针，只是内侧的针1腹面。
8. 旋转头部，使培养皿的表面上喙侧。喙角质层和大脑之间插入针1次，并用针2，遵循相同的路径，作为第一针。理想的情况下，将囊剥离因为这些连接都视叶的大脑是在稳定记录大脑的重要。
9. 气管，气囊，和其他结缔组织使用两个精尖钳小心取出。
10. 整个清扫应采取3-10分钟

二。安装的中枢神经系统

1. 大脑是用一个黄色的提示吸管转移到录音室。
2. 在录音室中，大脑是稳定放在铂帧两个细十字线与视叶和中央的大脑区域之间的交界处组织的联系。
3. 每个大脑是允许连续灌注含氧生理盐水（95％氧气和5％的二氧化碳），在录音室休息至少10分钟。整个录音期间继续灌注含氧生理盐水室。制备可视化使用一个堂堂正正的一个固定的舞台和一个40倍水浸泡的目标（Achroplan;数值孔径为0.8;蔡司）和Nomarski光学显微镜（Axioskop 2FS，德国蔡司，奥伯科亨）。绿色荧光蛋白被认为与BP 505-530荧光过滤器。

三。电

1. 8-14兆欧吸管用于全细胞记录
2. 电流钳和电压钳记录使用列表EPC7或Axopatch 200B中的放大器，一个Digidata 1322A DA转换器（分子器件的Foster City，CA），一个戴尔Dimension 8200电脑（Round Rock的戴尔电脑，德克萨斯州）， pClamp 9软件（Molecular Devices公司）。

讨论

孤立的整个大脑的准备，我们在这个视频说明允许在确定神经细胞，包括那些在嗅觉的处理途径，在成年果蝇大脑（谷和澳多德，2006年），的兴奋性突触传递的基本细胞机制的评估。这种方法是互补的完整的成年果蝇（Wilson等所有2004年）的大脑中的神经元活动的研究，在哺乳动物的大脑切片中的神经元相同的方式录音，录音清醒行为哺乳动物的互补。有两大优势原位果蝇大脑的编制相比，哺乳动物片。首先，?...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
#5 Foceps	Tool	Fine Science Tools	No. 11251-10	Be careful, never damage the fine tips of forceps
Papain	Reagent	Worthington Biochemical	3126	20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine
Dissecting microscope	SMZ-2B Model:C-PS	Nikon Instruments		Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle
Needle & Syringe		PrecisionGlide®?, Becton Dickinson Co	305175 & 309602	Cheap and durable
Upright microscope	Axioskop2 FS plus	Carl Zeiss, Inc.		Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp
Patch clamp amplifier	200 B	Molecular Devices
Digidata D-A converter	1322A	Molecular Devices