1.收集细菌培养整除数

1. 集合的时间的增长点前, 一天接种 20 毫升 50 毫升瓶与大肠杆菌胨大豆肉汤 (TSB)。
2. 培养过夜在 27 ° c。这个相对较长的潜伏期结果在野生型大肠杆菌的大约 10 固定相人口⁹ CFU/mL。
3. 第二天，使用准备文化的 100 μ L 接种 250 毫升的 TSB （在 500 毫升瓶）。调匀。 删除 5 毫升分装和冷藏立即在 4 ° c。这是 T = 0 或 T₀时间点，并且应该包含大约 4 x 10⁵ CFU/mL。
4. 将剩余的大肠杆菌（245 毫升） 的烧瓶置于恒温培养箱 37 ° C。删除 5 毫升整除数文化的每一小时、 达 8 h.存储每个分装在 4 ° c。指定这些整除数 T₁通过 T₈。

2.连续稀释法

1. 从冰箱和置于运输冰上的删除的大肠杆菌整除的数。直到使用保持所有文化在冰上。
2. 建立了一系列的稀释管获得不同稀释度的每个大肠杆菌文化 (图 3)。微量离心管，方便此函数。每个稀释管应该有 900 µ L 的稀释液 （无菌生理盐水）。为每个大肠杆菌文化 (T₀通过 T₈); 需要稀释系列根据表 2每个管的标签。
   
   图 3。电镀大肠杆菌过程的示意图。
3. 从标记为 T₀管加 100 μ L 的大肠杆菌开始稀释 (初始大肠杆菌文化) 到管 A，是 T₀10^-1稀释。涡管 5 s。
4. 随后，添加 100 微升管 A 到下管的生理盐水，管 B，这就是 T₀10^-2稀释。继续为每个时间点分装所需的稀释系列。记得到涡传输每个管之前。它也是重要的是为每个传输利用新的移液器提示。

表 2。稀释系列所需的每个大肠杆菌文化。

3.电镀

1. 将镀三倍稀释物每个大肠杆菌文化时间点分装，根据表 3。标签板的时间点 (T₁通过 T₈)，稀释因子和要添加卷。利用一式三份的盘子里，每个稀释。
2. 添加每个稀释 100 μ 的 L 到板吹打到中心大量琼脂平板 (图 3)。利用火焰分装立即传播消毒"L"形玻璃棒。如果分装不立即传播，它在原位上板，造成在点的初始接种细菌过度生长能够吸收或吸附。
3. 对于每个时间点 T₁通过 T₈的稀释系列重复电镀。记住要消毒杆板之间和特别是之间不同的稀释液。
4. 一旦板已经干了几分钟，反转，一夜之间放在 37 ° C 的孵化器。逆变板排除冷凝从落在琼脂平板上。经过一夜的孵化，板应存放在冰箱。

^*低稀释考虑到低人口由于死亡阶段。

表 3.电镀大肠杆菌文化协议。

4.计数殖民地和计算均值生成时间

1. 检查板的殖民地的均匀性和没有受到污染。
2. 为每个时间点 (T₀通过 T₈)，选择一个包含 30 和 300 殖民地与张一式三份板之间的稀释。
3. 使用稀释因子，背-计算每毫升的原始文化在时间点 T₀到 T₈细胞数目。例如，如果从 10^-4稀释造成的殖民地的数量是 30、 28 和 32:
   意思是菌落总数 = 30 殖民地
   这些都源于 10^-4稀释 0.1 毫升
   每毫升菌落总数 = 30 × 10⁴ = 3 x 10⁶
4. 情节日志₁₀ CFU/mL 随时间 （以小时为单位）。
5. 从图，确定的指数增长的阶段。每一次在指数增长阶段和相应的单元格编号内使用 2 的时间点，计算均值生成时间。