根据制造商的说明准备高压冷冻或HPF机器，至少在开始实验前两个小时。将A型HPF铝载体转移到含有1毫升乙醇的2毫米离心管中，并在超声波清洗机中超声处理10分钟。在覆盖有定性滤纸的培养皿中干燥载体。
将预先清洁的载体浸泡在1-十六碳烯中。使用细镊子从HeLa细胞培养皿中取出预先准备好的蓝宝石盘。用定性滤纸触摸标记的表面以去除多余的介质。
将蓝宝石圆盘安装到 HPF 样品支架中，并用含有 1-十六烯的 0.025 毫米深铝载体快速盖住圆盘。用定性滤纸吸出过量溶液。装载试样架进行高压冷冻。
在液氮下将蓝宝石盘载体组件卸载到泡沫冷冻盒中。在通风橱中的20毫米圆形聚丙烯容器中准备两毫升冷冻替代固定或FSF溶液，并使用液氮冷冻。使用一对预冷的镊子将蓝宝石盘和载体组件装入装有液氮冷冻 FSF 溶液的容器中。
将此容器转移到预冷的自动冷冻替代机室中，以便在零下90摄氏度下进行FSF处理。将标本保持在零下 90 摄氏度一小时，然后用预冷镊子将蓝宝石盘与载体分开，确保蓝宝石盘的标记侧面朝下。将标本在零下 90 摄氏度下再保温 8 到 10 小时，然后在三小时内升温到零下 60 摄氏度。
用预冷的丙酮替换容器中的FSF溶液，并在零下60摄氏度下孵育一小时。重复这种丙酮洗涤两次。在三小时内预热至零下 30 摄氏度。
同时，在零下30摄氏度的两毫升离心管中制备并预冷两毫升FSF溶液。用FSF溶液二代替丙酮，并在零下30摄氏度下孵育3小时。然后用预冷的丙酮替换容器中的FSF溶液二，并在零下30摄氏度下孵育30分钟。
重复这种丙酮洗涤两次。在两小时内加热零下 30 到 4 摄氏度。用两毫升0.2摩尔HEPES缓冲液代替丙酮。
更换缓冲液一次，并在室温或四摄氏度下孵育过夜。
