Direkte Synthese von EM-sichtbaren Gold-Nanopartikeln in Zellen zur Proteinlokalisierungsanalyse mit gut erhaltener Ultrastruktur

Der Nachweis und die Lokalisierung von Proteinen sind in der biologischen Forschung unerlässlich. Unser Protokoll beschreibt eine neuartige EM-Markierungstechnologie unter Verwendung genetisch kodierter Tags, die eine Einzelmolekül-Visualisierung in situ mit gut erhaltener Ultrastruktur ermöglicht. Es ist wichtig, eine Überfixierung zu vermeiden.

Die Markierungsmethode basiert auf der Aktivität von Cystein in den Tags, die sehr empfindlich auf Aldehydvernetzung reagieren. Unser Protokoll vermeidet die Verwendung von Aldehyd-Fixiermitteln und bewahrt die Tag-Aktivität und -Ultrastruktur. zur gleichen Zeit.

Die Markierung von Schwellenländern war schon immer eine Herausforderung, da sie unter einer schlechten Morphologie oder einer ineffizienten Markierung litt. Unsere Protokolle synthetisieren In-situ-Nanopartikel direkt auf einzelnen Proteinen, um eine klare und präzise Lokalisierung der Zielproteine mit einem hohen Signal-Rausch-Verhältnis, hoher Effizienz und Spezifität zu ermöglichen. Bisher haben wir eine hervorragende Markierung in isolierten Proteinen, E.coli-Zellen, Hefezellen und HeLa-Zellen erreicht.

Wir werden die Methode für die Anwendung an Gewebeproben erforschen und optimieren. Durch die Kombination der vorherrschenden Kryo-FIB- und Kryo-EM-Technologien können wir wichtige biologische Fragestellungen beantworten.