La détection et la localisation des protéines sont essentielles dans la recherche biologique. Notre protocole décrit une nouvelle technologie de marquage EM utilisant des étiquettes codées génétiquement qui permet la visualisation d’une seule molécule in situ avec une ultrastructure bien préservée. Il est crucial d’éviter la surfixation.
La méthode de marquage est basée sur l’activité des cystéines dans les étiquettes, qui sont très sensibles à la réticulation des aldéhydes. Notre protocole évite l’utilisation de fixateurs d’aldéhydes et préserve l’activité du marqueur et l’ultrastructure. en même temps.
L’étiquetage EM a toujours été difficile, souffrant d’une mauvaise morphologie ou d’un étiquetage inefficace. Nos protocoles synthétisent des nanoparticules in situ directement sur des protéines individuelles pour fournir une localisation claire et précise des protéines cibles, avec un rapport signal sur bruit élevé, une efficacité et une spécificité élevées. Jusqu’à présent, nous avons obtenu un excellent marquage dans des protéines isolées, des cellules E. coli, des cellules de levure et des cellules HeLa.
Nous explorerons et optimiserons la méthode pour l’application aux échantillons de tissus. La combinaison des technologies cryo-FIB et cryo-EM nous permettra d’aborder d’importantes questions biologiques.
