用于 3D 多培养的皮肤细胞球的制备

要开始悬滴法，将 20 微升预先准备好的皮肤细胞悬液移液移液到培养皿的盖子上。现在，用培养皿的下半部分盖住盖子，轻轻翻转以形成悬垂的液滴。向培养皿中加入无菌水，以防止液滴中完全生长的培养基蒸发。

将液滴在 37 摄氏度下孵育 48 至 72 小时。接下来，用完整的生长培养基填充新板的孔。使用无菌切割移液器吸头，将细胞球转移到多孔板的孔中。

实验前，将转移的球体在 37 摄氏度的多孔板中孵育一天。对于限制细胞粘附方法，首先将 100 微升 1% 表面活性剂溶液的 PBS 溶液加入 U 形底板的每个孔中。接下来，将板与 37 摄氏度的溶液一起孵育 24 小时。

现在，以所需的细胞密度制备细胞悬液。从孔中吸出表面活性剂溶液，然后将 50 微升细胞悬液接种到每个孔中。最后，将板在 37 摄氏度下孵育 24 小时以达到细胞聚集体。

由 10， 000 个细胞组成的球体更容易操作，因为它们在孔中可见。较大的球体表现出较低的稳定性。不同的细胞类型形成了不同颜色的球体。

完美的圆形球体在悬挂法的转移过程中容易变形。需要准确处理以减少变形，从而获得完整的细胞聚集体。不准确和缺乏经验导致球体损坏。