用于肌腱研究和工程的成人正常人真皮成纤维细胞的 2D 扩张、2D 刺激和 3D 类器官成熟

首先，离心胰蛋白酶化正常的人真皮成纤维细胞。从离心管中取出上清液。将预热的补充 DMEM 低葡萄糖培养基加入沉淀中，并充分混合以重悬。

将正常的人真皮成纤维细胞置于 10 厘米贴壁细胞培养皿中。以横向方式轻轻摇晃盘子。2D 刺激 14 天后，当细胞汇合时，吸出培养基，并使用细胞刮刀轻轻快速地将形成的细胞片从培养皿中分离出来。

同时，将细胞片卷成 3D 棒状类器官。将正常的人真皮成纤维细胞类器官转移到 10 厘米宽的非粘附培养皿中。用尺子测量伸长率。

然后用镊子握住类器官的一侧，轻轻拉伸类器官，直到其轴向拉长约 10% 使用镊子，手动将金属销穿过类器官的两边压入塑料盘中以固定它。最后，对于 3D 成熟，在孵育前加入 10 毫升预热的补充 DMEM 高糖培养基。在 3D 成熟步骤的第 0 天和第 14 天，3D 类器官的总形态显示出闪闪发光的白色外观。

随着时间的流逝，类器官收缩并显得更致密。使用 H E 染色评估类器官的形态。在第一天，类器官显示出不相连的层，主要由被少量基质包围的细胞组成。

各层内的细胞表现出圆形和不同大小的细胞核。在第 14 天，观察到伊红信号明显增加，这表明基质沉积和融合层。此外，类器官显示存在包含对齐细胞的区域。

大多数细胞核具有相似的大小，偶尔被拉长。