首先,将微量移液器插入微量移液器拉拔器并拉动微量注射针。在解剖镜下,将针尖与载物台千分尺的划分对齐。以千分尺作为测量指南,使用一对锋利的镊子将针头折断至略大于细胞直径的孔径。
使用配备有移液器填充器的 50 毫升注射器,用矿物油完全填充针头。在移植装置上,转动三通旋塞阀,使其长臂面向微量注射泵。按下储液罐注射器柱塞以冲洗液压管路上的所有气泡。
在柱塞上保持轻微的压力,转动三通旋塞阀,使长臂现在面向储液槽注射器。然后将针插入支架,不要引入气泡。调整指针,使其以与水平面成 10 到 15 度的角度直接面向左侧。
使用粗略和精细的显微操作器,在显微镜物镜下操纵针尖以使其聚焦。如果液体流入或流出针尖,请使用注射泵调节压力,直到观察到油和 RPT 之间出现稳定的弯月面。如果仍有油泡,请向右移动针头以将其尖端从 RPT 中抽出,然后回到左侧以重新定位。
将载物台向右移动,直到供体动物重新进入视野。重新居中并专注于要移植的细胞,将针头与动物外部的细胞对齐。接下来,将针头插入供体动物中,如有必要,用微量注射泵重新稳定针尖中的油弯月面。
将针尖靠在感兴趣的细胞上,然后用微量注射泵轻轻吸力。取出足够的细胞后,从供体中取出针头并重新稳定针尖中的材料。重新定位载物台,使第一只宿主动物进入视野/中心,并专注于要放置细胞的区域,并将针头与动物外的该区域对齐。
然后将针头插入宿主动物中,并重新稳定针尖中的油弯月面。将针尖置于沉积部位,并用微量注射泵轻轻按压,直到从针头中释放出正确数量的供体细胞。最后,从主机上拔下针头。
移植后 12 小时,在宿主迷走神经运动核的前部成功观察到供体神经元,显示出健康神经突突起的迹象。到移植后两天,移植的神经元不仅保持正确位置,而且还开始向第四咽弓延伸新的轴突,表明成功整合到宿主体内。