Hochauflösende Zelltransplantation in embryonalen und larvalen Zebrafischen

Unser Labor untersucht, wie die zelluläre Konnektivität im Nervensystem während der Entwicklung und Regeneration strukturiert ist. Wir untersuchen, wie Umweltsignale das neuronale Verhalten beeinflussen, indem wir Zelltransplantationen verwenden, um zu untersuchen, wie sich ihr Verhalten verändert, wenn sie in verschiedenen genetischen räumlichen oder zeitlichen Umgebungen platziert werden. Während die Transplantation bei Zebrafischembryonen üblich ist, wird sie im Allgemeinen während der Blastula- und Gastrula-Stadien durchgeführt, wenn die Zellen weitgehend undifferenziert sind.

Dies ist wertvoll für die Generierung genetischer Mosaike, schränkt aber die Fähigkeit der Technik ein, zu untersuchen, wie die räumlich-zeitliche Signaldynamik die Entwicklung über diese Stadien hinaus beeinflusst. Hier stellen wir ein Protokoll vor, das die Transplantation von Zellen, einschließlich differenzierter Neuronen in Embryonen und Larven, bis zu mindestens sieben Tage nach der Befruchtung ermöglicht. Wir können nur eine Zelle mit hoher räumlicher und zeitlicher Auflösung transplantieren und die genetische Fluoreszenzmarkierung für die Langzeitverfolgung transplantierter Zellen im Wirtstier verwenden.

Dieses Protokoll ermöglicht es uns, die genetische, räumliche und zeitliche Umgebung von Zellen in vielen verschiedenen Entwicklungsstadien zu verändern, was neue Möglichkeiten eröffnet, die Prinzipien der Stilsignalisierung während der Entwicklung und Regeneration zu untersuchen.