Transplante de células de alta resolução em peixe-zebra embrionário e larval

Nosso laboratório estuda como a conectividade celular é padronizada no sistema nervoso durante o desenvolvimento e a regeneração. Examinamos como os sinais ambientais influenciam o comportamento neural usando o transplante de células para abordar como seu comportamento muda quando são colocados em diferentes ambientes genéticos, espaciais ou temporais. Embora o transplante seja comum em embriões de peixe-zebra, geralmente é realizado durante os estágios de blástula e gástrula, quando as células são amplamente indiferenciadas.

Isso é valioso para gerar mosaicos genéticos, mas limita a capacidade da técnica de interrogar como a dinâmica de sinalização espaço-temporal influencia o desenvolvimento além desses estágios. Aqui, apresentamos um protocolo que permite o transplante de células, incluindo neurônios diferenciados em embriões e larvas até pelo menos sete dias após a fertilização. Podemos transplantar apenas uma célula com alta resolução espacial e temporal e usar marcação genética fluorescente para rastreamento de longo prazo de células transplantadas no animal hospedeiro.

Este protocolo nos permite alterar o ambiente genético, espacial e temporal das células em muitos estágios de desenvolvimento diferentes, abrindo novas oportunidades para examinar os princípios de sinalização de estilo durante o desenvolvimento e a regeneração.