首先，将 500 毫摩尔氯化钠运动缓冲液中的一腔体积的纯化人肌球蛋白-7a 蛋白加入流通室中，并在室温下孵育 5 分钟。在 150 毫摩尔氯化钠运动缓冲液中，用三个腔室体积（每毫升 1 毫克 BSA）洗涤流通室。之后，在出口处使用干净的抹布吸取液体以吸收多余的液体。
然后，在 150 毫摩尔氯化钠运动缓冲液中流过一个腔室体积的 10 纳摩尔罗丹明鬼笔环肽标记的 F-肌动蛋白。在具有 100 倍物镜的荧光显微镜下监测肌动蛋白丝与表面的结合。确保用于跟踪的最佳肌动蛋白丝密度，视野中有足够的丝，但足够稀疏以防止重叠。
接下来，用三个腔室体积的 150 毫摩尔氯化钠运动缓冲液洗涤流动室，以去除未结合的肌动蛋白丝和过量的罗丹明-鬼笔环肽。为了启动运动，将最终缓冲液的一个腔室体积添加到流动室中。然后，使用 561 纳米激发在荧光显微镜上记录图像，以可视化罗丹明 - 鬼笔环肽标记的肌动蛋白。
在载玻片上找到具有所需肌动蛋白密度的区域，每 30 秒捕获一次图像，持续 30 分钟。接下来，从 GitHub 存储库下载并安装 Fast 程序。确保它是 Python 3 兼容版本，带有用于 ND2 文件转换的附加模块。
使用容差值 33 运行 Fast 程序，以仅保留平稳移动的细丝。之后，使用 Fast 程序分析新创建的 TIFF 图像。将 x 最大值设置为 20， 000 纳米，将 y 最大值设置为每秒 20 纳米，以表示最长细丝长度和最大细丝速度。
然后，使用 px 将获取的图像的像素大小设置为 65 纳米。将 minV 设置为 0.1 纳米/秒，作为分析中包含细丝所需的最小速度。要设置帧之间允许链接的灯丝的最大距离，请使用 maxD，以避免在帧之间链接单独的灯丝。
使用 pt 设置细丝速度波动的容差，仅包括那些运动平稳的细丝。最后，使用 d 表示包含用于分析的 TIFF 堆栈的文件夹。肌动蛋白丝滑动测定证明了肌球蛋白 7a 的运动缓慢，视频播放加速了 500 倍以可视化运动。
肌球蛋白-7a 的速度分布显示峰值低于每秒 5 纳米，证实了其缓慢的运动。
