我们感谢西尔维·为该协议的的关键的读数的勒萨热和的所有劳顾会委员。这项工作被受支持的由一个从的作者：卫生研究所（CIHR）的的加拿大研究院的的授出日期（澳门币-77545）。纳萨莉拉布雷克被由一个FRSQ的高级奖学金的的支持，，和MELISSA的Mathieu收到1 NSERC亚历山大·格雷厄姆·加拿大贝尔公司研究生奖学金。

1。手术前的准备工作根据加拿大动物护理准则理事会处理小鼠。 <ol><li> anesthetise小鼠注射氯胺酮/甲苯​​噻嗪（150/300毫克/千克，IP）或异​​氟醚吸入（2％，1L氧气）。如果可以，异氟醚应该使用，因为它允许为更好地控制麻醉时间和深度。此外，氧管理的同时，支持动物的生理功能。此外，异氟醚直接消除肺部，因此并不需要肝，肾代谢。 </li><li>注入丁丙诺啡（0.05 - 0.1毫克/千克，SC）或另一种止​​痛药。 </li><li>适用于鼠标的眼睛上的药膏，手术前，以避免眼睛干涩（如果使用异氟醚）。 </li><li>确认鼠标是睡着了捏它的爪子，滚它的尾巴。如果鼠标没有反应，进行手术。 </li></ol> 2。手术<p类=“jove_content”&gt;很可能浅表淋巴结（LN），通过手术移除4：2腹股沟和2臂丛。 LN的隔离更容易在年轻瘦老鼠，因为在老年小鼠的脂肪组织的存在（6-8周）可与LN隔离干扰。然而，这一限制被克服，反复练习。为的小鼠舒适，我们收获一次最多2淋巴结，当我们执行时间课程实验，我们收获LNS每隔一天。此外，为防止感染，抗生素可以给鼠标，但我们不这样做，伤口愈合得很好。一个需要注意，根据实验设计，使用抗生素，可能会影响观察的结果（例如，如果细菌的反应测量）。请注意，所有仪器每次使用后消毒和无菌条件下保持整个程序。 <ol><li>鼠标放在其副作用。 </li><li>本地化的地区，在那里你会执行incisioN，这取决于你想收获的法律公告。 （ 图1）。 </li><li>洗必泰，或另一种消毒剂，适用于该地区。 </li><li>请用锋利的剪刀（约5毫米），无论是在前肢背部或后肢腹部附近（ 图1）以上的微小切口。 </li><li>删除松散的头发，用钳子切断。如果你愿意，你可以刮胡子鼠标，然后才作出的切口。但是，一个较长的过程，我们发现，这是没有必要以来，如下所示，它不会改善愈合，减少感染，这都是非常罕见的。 </li><li> 2钳拉伸切口才能看到的LN。切口可能达到10毫米。号法律公告出现灰褐色或暗比周围脂肪。 </li><li>捏用一个镊子的LN上的筋膜（薄膜覆盖的脂肪和组织），轻轻拉，不破坏周围组织。 </li><li>将第二个钳尽可能underneath的LN。第一镊子，打破筋膜和删除号法律公告。如果您已成功收获的LN，染色的血液应该出现在其中的LN以前所在的位置。需要注意的是等渗溶液中的LN汇。这个简单的测试，让您验证您已提取的一种法律公告，而不是脂肪组织。 </li><li>确认没有毛发在伤口。 </li><li>坚持2部分皮肤（皮肤内），装订剪辑，关闭切口。我们使用应用镊子一些米​​歇尔夹。安装1或2个片段，切口的大小而定。大多数情况下，剪辑时脱落的组织愈合。 </li></ol> 3。术后护理<ol><li>笼底部添加一些湿的食物，手术后容易使老鼠能养活。 </li><li>手术后约6至8小时，检查，以确保他们没有经历过痛苦的小鼠。仔细观察他们的行为（姿势，步态，毛皮的外观与同类和相互作用）。如果小鼠的整体外观差，管理的丁丙诺啡第二剂量。由老鼠第二天应该恢复其正常的行为，否则，继续丁丙诺啡的管理。小鼠从未达到先前确定的，由动物保健理事会接受的终点。你可能想寻求咨询和帮助你照顾动物饲养箱技术员。 </li></ol> 4。淋巴结处理<ol><li>在实验室中，获得单细胞悬液，游离为您常​​用的程序的法律公告。我们LN和对磨砂幻灯片按常规获得1-2×10 6细胞每号法律公告。另外，我们准备RNA提取的LN。 </li><li>细胞染色为你平时的协议。你应该获得预期的LN流式细胞仪配置文件。 </li></ol> 5。代表结果例如前部和侧散射带够很多经手术或从牺牲的鼠标（ 图2）从麻醉鼠标收获淋巴结。在现场淋巴细胞门的形象和细胞的百分比相同，表明法律公告手术是一个合适的技术，收获细胞。 <img alt="图1" src="/files/ftp_upload/3444/3444fig1.jpg" /> 图1。腹股沟和鼠标臂LN的本地化。 A.腹股沟号法律公告位于略高于后肢，稍往肚子。 B.臂丛LN是位于前腿后面。 <img alt="图2" src="/files/ftp_upload/3444/3444fig2.jpg" /> LN的手术后得到图2。流量淋巴细胞流式细胞仪轮廓。前部和侧散射剖面显示从麻醉收获的淋巴结（一）经手术或从牺牲的鼠标（二）etized鼠标。淋巴结收获，分离和流式细胞仪分析。细胞在活的淋巴细胞门的百分比显示。

<ol>
	<li>Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+but+curtailed+T-cell+response+to+very+low-affinity+antigen.">Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen.</a> Nature. 458, 211-214 (2009).</li><li>Vezys, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+CD8+T-cell+compartment+grows+in+size+with+immunological+experience.">Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience.</a> Nature. 457, 196-199 (2009).</li><li>Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+persistence+of+memory+CD8(+)+T+cells+depend+on+T+cell+factor+1.">Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1.</a> Immunity. 33, 229-240 (2010).</li><li>Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+central+memory+CD8+T+cells+is+independent+of+CD62L-mediated+trafficking+to+lymph+nodes.">Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes.</a> J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).</li><li>Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+complementation+of+MHC+class+II+deficiency+by+intrathymic+delivery+of+recombinant+adenoviruses.">Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses.</a> Immunity. 7, 123-134 (1997).</li><li>Witherden, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetracycline-controllable+selection+of+CD4(+)+T+cells:+half-life+and+survival+signals+in+the+absence+of+major+histocompatibility+complex+class+II+molecules.">Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules.</a> J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).</li><li>Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+much+TCR+does+a+T+cell+need.">How much TCR does a T cell need.</a> Immunity. 15, 71-82 (2001).</li><li>Leignadier, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitope+density+influences+CD8++memory+T+cell+differentiation.">Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation.</a> PLoS One. 5, e13740 (2010).</li><li>Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+T-lymphocyte+survival+does+not+require+T-cell+receptor+expression.">Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).</li><li>Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+persistence+is+required+throughout+the+expansion+phase+of+a+CD4(+)+T+cell+response.">Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response.</a> J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).</li><li>Bassett, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T-cell+expansion+and+maintenance+after+recombinant+adenovirus+immunization+rely+upon+cooperation+between+hematopoietic+and+nonhematopoietic+antigen-presenting+cells.">CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells.</a> Blood. 117, 1146-1155 (2011).</li><li>Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7+receptor+expression+levels+do+not+identify+CD8++memory+T+lymphocyte+precursors+following+peptide+immunization.">IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization.</a> J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).</li><li>Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lowering+TCR+expression+on+naive+CD8++T+cells+does+not+affect+memory+T-cell+differentiation.">Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation.</a> Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).</li></ol>

没有利益冲突的声明。

我们已经描述了LN的手术协议，它可以适用于许多实验系统。虽然非常有益的免疫反应或免疫细胞的平衡，这种技术具有一些限制。首先，只有四个LNS可以收获。二，免疫反应的研究必须是系统性的，或发生在腹股沟浅淋巴结或臂丛（皮肤排出）。最后，收获细胞数号法律公告搬迁的质量，技术的限制，这可能有助于实验变异时需要绝对细胞数的影响。然而，对靶细胞的百分比，对自己，可以提?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 试剂名称 </td><td> 公司 </td><td> 目录编号 </td><td> 评论 </td></tr><tr><td>格雷夫精细模式高级钳</td><td>哈佛仪器</td><td> 52-2144 </td><td>强烈弯曲，10厘米（4英寸），0.8毫米尖</td></tr><tr><td>米歇尔剪辑应用和删除钳</td><td>哈佛仪器</td><td> 52-3779 </td><td> 12.5厘米（5） </td></tr><tr><td>米歇尔剪辑100 </td><td>哈佛仪器</td><td> 52-3746 </td><td> 7.5-1.75毫米</td></tr><tr><td> temgesic（盐酸丁丙诺啡） </td><td>先灵葆雅</td><td></td><td></td></tr><tr><td> vetalar（盐酸氯胺酮） </td><td> boniche动物保健</td><td></td><td>根据DIN：01989529 </td></tr><tr><td> rompun（二甲苯胺噻嗪） </td><td>拜耳</td> &lt;TD&gt; </td><td>根据DIN：02169592 </td></tr><tr><td>异氟醚</td><td>雅培</td><td></td><td>根据DIN：02032384 </td></tr><tr><td> hypotears眼膏</td><td>诺华Ophtalmics </td><td></td><td>根据DIN：02133288 </td></tr><tr><td> baxedin（Clorhexidine葡萄糖2％，异丙醇70％） </td><td>欧米茄</td><td> L0000017 </td><td>根据DIN：02251477 </td></tr></tbody></table>

murine superficial lymph node surgery

在免疫学领域，了解进展对疫苗，感染或肿瘤的免疫反应，反应之后往往随着时间的推移。同样，淋巴细胞稳态的研究需要时间课程实验。这些研究是在相同的鼠标理想，以减少实验的变异，以及使用的老鼠数量。抽血时间课程实验允许的性能，但它只能提供约外周血淋巴细胞的信息，并提供数量有限的细胞1-4。由于通过人体循环和居住在淋巴结中的淋巴细胞有不同的特性，重要的是要检查这两个地方。淋巴结顺序切除手术提供了一个独特的机会，后续的免疫反应或免疫细胞膨胀，随着时间的推移相同的鼠标。此外，这种技术的产生，这是足够的PE 1-2X10 6个淋巴结细胞之间rform表型特征和/或功能分析。顺序淋巴结手术或淋巴结清扫已成功地应用于我们和其他国家5-11。在这里，我们描述如何可以通过一个小切口，在皮肤一个anesthetised鼠标删除臂丛和腹股沟淋巴结肿大。由于手术是肤浅的，并迅速完​​成，鼠标恢复速度非常快，愈合好，不会遇到过多的疼痛。每隔一天，有可能收获一个或两个淋巴结允许时间课程实验。因此，该技术是适合学习节点居住淋巴细胞淋巴结的特点，随着时间的推移。这种方法适用于各种实验设计，我们相信，许多实验室将受益于执行顺序淋巴结手术。

Watch this Scientific Journal Video about Murine Superficial Lymph Node Surgery at JoVE.com

Murine Superficial Lymph Node Surgery

遵循多时间内相同的鼠标免疫反应的进展，淋巴结可以依次通过手术切除。在这里，我们描述了这种技术可以如何执行。

小鼠浅表淋巴结手术

In the field of immunology, to understand the progression of an immune response against a vaccine, an infection or a tumour, the response is often ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

41.9K 次观看.  Maisonneuve-Rosemont Hospital Research Center. 遵循多时间内相同的鼠标免疫反应的进展，淋巴结可以依次通过手术切除。在这里，我们描述了这种技术可以如何执行。