我们感谢建华岭，雷蒙德·麦克唐纳，高尔文斯威夫特，米歇尔·格里芬，保罗格里波和Satyanarayana Rachagani了他们的宝贵意见，建议和分享他们的协议。这项工作是由授出U01CA111294从俄亥俄州立大学院内研究计划的理念发展奖的支持。

1。准备以下做法坚持以该机构的动物护理和使用委员会（IACUC）设置的策略。 <ol><li>建议在隔离不超过6小鼠胰腺中任何一天。让所有的手术器械清洁和灭菌，每只动物一组。 </li><li>标记所有离心管。 4个2 ml离心管每只动物。 </li><li>放置8毫升裂解试剂在冰上的50ml离心管中。注意：当纯化试剂盒自带的硫氰酸胍酚试剂，适合于胰腺分离，裂解试剂使用，因为大量是每个隔离必要的。 </li><li>免除约10毫升以下解决方案集成到15ml离心管清洗均质机的叶片。乙醇，70％（2管），HPLC级水（1管）和HPLC级水约含200μLRNA酶的客场或同等核糖核酸酶灭活。 </li></oL&gt; 2，外科，胰腺解剖和同质化<ol><li>将1-2毫升的异氟醚为含棉纱布或纸巾罐。将小鼠放置于阻止他们到达异氟醚的源的平台。加入新鲜的异氟醚的麻醉罐每只小鼠前。 </li><li>轻轻将鼠标放到含有异氟醚的罐子。盖上瓶子并通过轻轻地转动瓶子来回监测麻醉的效果。动物被麻醉，一旦它在无法站立在它自己的。 </li><li>为了确认麻醉，从罐子里取出的动物和应用坚定的脚趾捏。如果鼠标没有反应到脚趾捏，继续执行步骤2.5。 </li><li>如果鼠标反应到脚趾捏，然后重复步骤2.2至2.3。 </li><li>将动物麻醉的台式俯卧位。紧紧把左手放在鼠标的子宫颈脱臼鼠标的子宫颈。我们ing的右手抓住老鼠的尾巴，快速地向上拉以大约45°角脱臼子宫颈。 </li><li>通过使用25号皮下注射针头的每个动物的四只爪子的刺入平坦面固定到胎体的表面（一个电平片发泡胶覆盖纸巾）。 </li><li>用无菌手术器械，切断小鼠的中部开，并迅速从小鼠取出胰腺。使用镊子举行胰腺和使用弹簧剪刀从脾脏和小肠切开它。要小心，不要从鼠标的拆卸过程中拉伸胰腺。组织破坏可能释放核糖核酸酶。注意：它需要从鼠标移除胰脏的时间是至关重要的。本领域技术人员应该能够解剖胰腺在约1分钟或更少。 </li><li>将整个胰腺入50毫升的试管装有8毫升冰冷的裂解试剂。盖上管，并简要摇沉浸在TISSUE到试剂和进行无延迟的下一个步骤。裂解试剂来组织的比例是至关重要的。看到结果的RNA的完整性使用不同体积的裂解试剂中分离出来的比较部分。 </li><li>匀化，持续5秒。它以按均质叶片的离心管的底部，以允许组织被拉到到叶片效率均匀化是重要的。 </li></ol> 3，去除未消化的组织的注意：以下均质化，组织的小的位将保持在裂解试剂。它快速裂解组织留下一些未消化的组织，而不是通过均质化和RNA的降解风险是比较重要的。 <ol><li>转让2毫升裂解试剂的含有溶解的胰腺2ml微量离心管中。收集每隔离匀浆两个离心管。倒掉剩余的匀浆或储存在-80°C为今后的研究。 </li><li>一分钱rifuge在4℃，12000×g离心5分钟以沉淀未消化的组织。这是一个重要的步骤，因为未消化的组织的残留成RNA的后续的解决方案可能会污染样品与核糖核酸（步骤5.13）。 </li><li>转让将1ml上清液到2ml微量离心管中。与隔离，立即进行和复制管储存于-80℃以备将来使用。放置装有匀浆于湿冰，而继续进行下一个步骤的所有管道。 </li><li>出售剩余裂解试剂到合适的化学废物容器。 </li></ol>在均质机叶片4。清洁<ol><li>前继续下一隔离，通过将它们放置在10毫升的70％乙醇清洗匀浆器叶片。激活有关的均化器进行20秒以除去组织可能被捕获在叶片任何块。 </li><li>用200μl的枪头移除留在均质机叶片的任何碎片。 </l我&gt; <li>水，一般核糖核酸酶失活和70％乙醇重复步骤4.1。用干净的金均质轴擦拭。 </li><li>对于其余的动物的胰腺隔离重复步骤2.1中，从每个动物单独的，而不是集中在RNA分离饲养的RNA。 </li></ol> 5，RNA分离下面的部分是相同的纯化试剂盒协议。纯化试剂盒的优点是，它会分离，包括小RNA的总RNA。 <ol><li>如果使用冷冻组织匀浆液，解冻湿冰上，静置在室温下5分钟。 </li><li>加入200μl氯仿，帽管，并用手用力摇动15秒。让所述管支架在室温下2-3分钟。 </li><li>离心15分钟，12,000×g离心，4°C。 </li><li>传送上层的水层到微量离心管中。加1.5倍体积的异丙醇，并通过上下吹打数次调匀。 </li><li>转让最多700微升的样品放入一个旋转柱是放置在2 ml收集管。盖上盖子，离心机在8000×g离心15秒在室温。 </li><li>弃去流过。 </li><li>重复步骤5.5-5.6，使用该样品的其余部分。 </li><li>加入700μlBuffer RWT到离心柱。离心15秒，8,000×g的。弃去流过。 </li><li>移液管将500μl缓冲液RPE到离心柱。离心15秒，8,000×g离心洗柱。弃去流过。 </li><li>加入500μl缓冲液RPE到离心柱。离心2分钟在8000 XG干柱。 </li><li>离心柱转移到1.5 ml离心管。吸取80微升核糖核酸酶的水直接喷在旋转柱膜。离心1分钟，在8000×g离心来洗脱RNA。 </li><li>加入1μlRNA酶抑制剂的RNA溶液。储存在-80°C或进行至5.13。 </li><li>为了验证RNA的完整性，首先计算RNA的conce使用分光光度计ntration和二百八十分之二百六十比。 </li><li>稀释的RNA溶液的一部分以约500纳克/微升用分子生物学级别水。 </li><li>确定RNA的完整性（ 即 RIN）利用毛细管电泳分析。约5微升RNA溶液是足够的分析。 </li><li>分装的RNA溶液（参见图2），并存储于-80℃。 </li></ol>

<ol>
	<li>Chen, C., Ridzon, D. A., Broomer, A. J., Zhou, Z., Lee, D. H., Nguyen, J. T., Barbisin, M., Xu, N. L., Mahuvakar, V. R., Andersen, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+quantification+of+microRNAs+by+stem-loop+RT-PCR.">Real-time quantification of microRNAs by stem-loop RT-PCR.</a> Nucleic Acids Res. 33, e179 (2005).</li><li>Chirgwin, J. M., Przybyla, A. E., MacDonald, R. J., Rutter, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+biologically+active+ribonucleic+acid+from+sources+enriched+in+ribonuclease.">Isolation of biologically active ribonucleic acid from sources enriched in ribonuclease.</a> Biochemistry. 18, 5294-5299 (1979).</li><li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidinium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction.">Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.</a> Anal Biochem. 162, 156-159 (1987).</li><li>Griffin, M., Abu-El-Haija, M., Abu-El-Haija, M., Rokhlina, T., Uc, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+and+versatile+method+for+isolation+of+high-quality+RNA+from+pancreas.">Simplified and versatile method for isolation of high-quality RNA from pancreas.</a> Biotechniques. 52, 332-334 (2012).</li><li>Iyer, V. R., Eisen, M. B., Ross, D. T., Schuler, G., Moore, T., Lee, J. C., Trent, J. M., Staudt, L. M., Hudson Jr, J., Boguski, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcriptional+program+in+the+response+of+human+fibroblasts+to+serum.">The transcriptional program in the response of human fibroblasts to serum.</a> Science. 283, 83-87 (1999).</li><li>Lenstra, J. A., Beintema, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+amino+acid+sequence+of+mouse+pancreatic+ribonuclease.+Extremely+rapid+evolutionary+rates+of+the+myomorph+rodent+ribonucleases.">The amino acid sequence of mouse pancreatic ribonuclease. Extremely rapid evolutionary rates of the myomorph rodent ribonucleases.</a> European journal of biochemistry FEBS. 98, 399-408 (1979).</li><li>Mullin, A. E., Soukatcheva, G., Verchere, C. B., Chantler, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+in+situ+ductal+perfusion+to+facilitate+isolation+of+high-quality+RNA+from+mouse+pancreas.">Application of in situ ductal perfusion to facilitate isolation of high-quality RNA from mouse pancreas.</a> Biotechniques. 40, 617-621 (2006).</li><li>Rio, D. C., Ares, M., Hannon, G. J., Nilsen, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> RNA A Laboratory Manual. , (2011).</li><li>Streit, S., Michalski, C. W., Erkan, M., Kleeff, J., Friess, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Northern+blot+analysis+for+detection+and+quantification+of+RNA+in+pancreatic+cancer+cells+and+tissues.">Northern blot analysis for detection and quantification of RNA in pancreatic cancer cells and tissues.</a> Nat Protoc. 4, 37-43 (2009).</li><li>Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+murine+islet+isolation+and+subcapsular+kidney+transplantation.">A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. , (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

从被核糖核酸酶丰富的组织中分离RNA代表了分子生物学实验的一大挑战。各种试剂和试剂盒是市售的主要依据RNA提取的酚异硫氰酸胍法。硫氰酸胍变性蛋白，从而减少核糖核酸酶的活性。然而，核糖核酸酶在胰腺的庞大规模需要额外的修改，RNA分离标准协议。协议是在这里报道，基于标准的异硫氰酸胍法还包含几个关键的改进，以及提示RNA的核糖核酸酶丰富的组织如胰腺成功分离。 <p class="jove...

需要常规的分子生物学实验，如Northern印迹9，定量RT-PCR检测1或基因表达谱5与诚信度高的RNA分离。大多数现代的RNA分离方法，是根据对硫氰酸胍协议2，修改3。硫氰酸胍是一种强的蛋白质变性剂，并有效地破坏大多数条件下核糖核酸酶的活性。 Chomczynski和Sacchi 3的流行的方法结合到苯酚的硫氰酸胍裂解溶液，减少了隔离时间约4小时。许多市售的RNA提取试剂基于Chomczynski和Sacchi方法3。 核糖核酸酶丰富的组织如人类或小鼠胰腺呈现为分离RNA一个额外的挑战。小鼠胰腺可含有高达75毫克核糖核酸酶6的其中一些将被释放超级碗造成组织自溶胰腺组织克中断。的异硫氰酸胍协议的修改已经被成功地用于分离RNA从胰腺具有高完整性2，4，7，10，输液RNA稳定剂与高完整性4，7，10的RNA小鼠胰腺促进隔离的，但是输注解决方案集成到胰腺需要很高的技巧，可能需要专门的工具，如解剖显微镜和手术过程中破坏的组织架构，可能会导致细胞裂解。组织灌注与RNA的稳定剂可能干扰其他应用，包括蛋白分离和组织学染色。此外，这种技术不适合于从人胰腺中分离RNA。其他协议需要由研究者2编制具体的解决方案。 我们报告一个协议来分离RNA从小鼠胰腺诚信度高。钍Ë协议使用先前公布的方法要素，并在很大程度上基于标准的酚/异硫氰酸胍基裂解试剂的协议。它不需要专门的解决方案的准备，也不需要输液剂进入胰腺。对于成功的RNA分离的关键步骤包括一个高酚/胍基裂解试剂对组织的比例，除去相分离和包容核糖核酸酶抑制剂到所得到的RNA溶液先未消化的组织。使用这些和其它的修改，我们通常分离RNA与RIN大于7被用于常规的基因表达分析。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="788">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:93px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:360px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Power Gen 500&#160;</td>
			<td style="width:93px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-261-03&#160;</td>
			<td>Homogenizer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">5424R</td>
			<td style="width:93px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Refrigerated microcentifuge</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Trizol reagent</td>
			<td style="width:93px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">15596018</td>
			<td>Lysis reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Student Vannas spring scissors</td>
			<td style="width:93px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">91500-09&#160;</td>
			<td>use to cut pancreas from attached tissues</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical scissors, 6 inch</td>
			<td style="width:93px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">08-951-20</td>
			<td>use to cut scin of mouse</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Blunt end forceps</td>
			<td style="width:93px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">1381239</td>
			<td>use to hold pancreas while dissecting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Isoflurane USP</td>
			<td style="width:93px;">Abbott Labs</td>
			<td style="width:119px;">4/8/5210</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Rnase out (40 U/&#181;l)</td>
			<td style="width:93px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">10777-019</td>
			<td>Rnase inhbitor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:216px;">Rnase Away</td>
			<td style="width:93px;">Ambion</td>
			<td style="width:119px;">10328-011</td>
			<td>General Rnase inactivator</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC grade water</td>
			<td style="width:93px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">W5-4</td>
			<td>For washing homogenizer blades</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Molecular Biology grade water</td>
			<td style="width:93px;">Hyclone</td>
			<td style="width:119px;">SH30538.03</td>
			<td>Elution of RNA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">miRNeasy Mini kit</td>
			<td style="width:93px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">217004</td>
			<td>Purification Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">2 ml microcentrifuge tubes, certified Rnase Dnase free</td>
			<td style="width:93px;">USA Scientific Plastics</td>
			<td style="width:119px;">1620-2700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">15 ml centrifuge tubes</td>
			<td style="width:93px;">Falcon</td>
			<td style="width:119px;">352099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">70% ethanol</td>
			<td style="width:93px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">100% ethanol</td>
			<td style="width:93px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">200 ul pipet tips</td>
			<td style="width:93px;">Rainin</td>
			<td style="width:119px;">GPL200F</td>
			<td>For cleaning homogenizer blades</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Chloroform</td>
			<td style="width:93px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">BP1145-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nanodrop</td>
			<td style="width:93px;">Thermo</td>
			<td style="width:119px;">ND-1000</td>
			<td>Spectrophotometer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bioanalyzer</td>
			<td style="width:93px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Capillary electrophoresis analyzer to measue RNA integrity</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RNAlater</td>
			<td style="width:93px;">Ambion</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>RNA Stabilization Reagent&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RNeasy&#160;spin columns&#160;</td>
			<td style="width:93px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>&#160;spin columns&#160;as a part of the miRNeasy Mini kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mice</td>
			<td style="width:93px;">Chales River</td>
			<td style="width:119px;">strain C57BL/6</td>
			<td style="width:360px;">Their age ranged from 4 to 12 months.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mice&#160;</td>
			<td style="width:93px;">Jackson Lab</td>
			<td style="width:119px;">strain 129</td>
			<td style="width:360px;">Their age ranged from 4 to 12 months.&#160;&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rna isolation from mouse pancreas: a ribonuclease-rich tissue

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge. As a primary function of the pancreas is to aid in digestion, mouse pancreas may contain as much a 75 mg of ribonuclease. We report modifications of standard phenol/guanidine thiocyanate lysis reagent protocols to isolate RNA from mouse pancreas. Guanidine thiocyanate is a strong protein denaturant and will effectively disrupt the activity of ribonuclease under most conditions. However, critical modifications to standard protocols are necessary to successfully isolate RNA from ribonuclease-rich tissues. Key steps include a high lysis reagent to tissue ratio, removal of undigested tissue prior to phase separation and inclusion of a ribonuclease inhibitor to the RNA solution. Using these and other modifications, we routinely isolate RNA with RNA Integrity Number (RIN) greater than 7. The isolated RNA is of suitable quality for routine gene expression analysis. Adaptation of this protocol to isolate RNA from ribonuclease rich tissues besides the pancreas should be readily achievable.

从1毫升裂解匀浆的总RNA得率是20〜40微克。外径260/280的比例通常约为2.0和RIN比7.0更加一致。如果RIN是≤6，隔离将需要被重复。有时，RIN，比8.0更高的实现。 去除之前的胰腺实施安乐死的小鼠的两种最常用的方法是CO 2窒息或吸入异氟醚。后跟颈椎脱位两种技术。因为它是可能的化学剂和/或程序时，可能会影响RNA的完整性，用这两种方法进行了比较分离小鼠胰腺核糖核...

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RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

We report a procedure to isolate RNA with high integrity from the ribonuclease rich mouse pancreas.

从小鼠胰腺RNA提取：核糖核酸酶丰富的组织

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

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