胰腺管输液:药物和病毒输送的有效和选择性方法

这种胰腺导管输液过程的总体目标是在胰腺中实现血统追踪、基因导入和细胞系特定靶向。这种方法可以帮助回答有关影响胰腺的疾病的关键问题，包括慢性胰腺炎、糖尿病和胰腺癌。首先，将麻醉小鼠置于解剖显微镜下，使其腹部位于视野的中心。

用手术胶带固定动物，然后在眼睛上涂上眼药膏，防止它们干燥。接下来，用厚厚的脱毛霜覆盖鼠标的腹部。大约三分钟后，用浸泡在70%乙醇中的纱布轻轻擦去奶油，去除所有头发。

最后，用70%乙醇擦拭皮肤，然后用10%的碘化物溶液去除任何污染物并消毒皮肤。要开始手术，用手术刀创建一个中线皮肤切口，从西菲德过程延伸到腰肌。然后使用 Adson 钳子，抬起腹膜，用剪刀制作一个小中线孔。

沿着腹膜的中线展开切口，使其长度等于皮肤切口的长度。接下来，使用钝缩回器拉起肝脏，在暴露普通胆管后，用弯曲的斗牛犬血管夹紧它。识别十二指肠和阿鲁加钳，把它拉出来，以显示作为白点可见的十二指肠第二部分前表面。

要识别胰腺导管，请按凹槽提取十二指肠，然后将 30 - 1 / 5 量表针切线放置到十二指肠上，并在其与正对立的墙壁上进行穿刺。要注入溶液，通过创建的十二指肠切除术引入连接到输液泵的导管，并沿着导管滑动，直到在容器内可见，但不会超过一厘米，以避免绕过小导管支流。用第二个弯曲的斗牛犬血管夹紧导管来固定导管。

然后打开泵，将溶液的 150 微升注入管道。接下来，注射到小鼠腹膜约1.5毫升的盐水，以避免任何注入体积的损失，然后用湿润的纱布覆盖暴露的肠道，以防止干燥。输液完成后，释放固定导管并使用斗牛犬夹，轻轻将其从胰腺导管中取出。

然后从普通胆管中释放夹子。通过在单层中连续给它们冲泡，并施用两剂镇痛剂中的第一剂，第二剂将在第二天给予，从而关闭腹膜和皮肤。然后将鼠标放回位于热灯下的笼子，为动物提供食物和水。

观察小鼠，直到它恢复足够的意识，表现在胸骨复位。手术后七天，从安乐死动物胰腺以及脾脏、肝脏和十二指肠中排出作为对照。将整个孤立的组织浸入4%的甲醛溶液中，并在4摄氏度下过夜。

一旦组织被修复，低温保护样品，在4摄氏度的4摄氏度下浸泡在30%的蔗糖溶液中过夜。经过一夜的低温保护，捕捉冻结样品在液氮和使用微原子，削减组织部分在6微米。最后，在荧光显微镜下对各部分进行成像。

这里展示的是小鼠在假手术后七天从小鼠身上切除的胰腺部分的微小图像，以及携带GFP基因的AAV8胰腺导管输注。肝脏、脾脏和十二指肠从注入 AAV8 的鼠标中分离出来，没有显示任何 GFP 信号，而胰腺则显示出突出的 GFP 表达，确认胰腺在胰腺导管输注后特定于病毒的传递。掌握后，此技术可在 10 分钟内正确执行。

在执行此程序时，执行仔细解剖并进行尽可能小的十二指肠切除术以引入导管非常重要。该技术开发后，为研究胰腺的研究人员研究一些困扰器官的病理铺平了道路，包括啮齿动物和大型动物模型中的慢性胰腺炎、糖尿病和胰腺癌。看完这段视频后，你应该对如何有效和有选择地注入胰腺导管有很好的了解。