המטרה הכוללת של הליך עירוי צינור הלבלב הזה היא לאפשר מעקב אחר שושלת היוחסין, הקדמת גנים, פילוח ספציפי לקו התאים בלבלב. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מרכזיות לגבי מחלות המשפיעות על הלבלב, כולל דלקת לבלב כרונית, סוכרת וסרטן הלבלב. כדי להתחיל, הנח עכבר מרדים מתחת למיקרוסקופ מנתח כך שהבטן שלו ממוקמת במרכז שדה הראייה.
לשתק את החיה עם סרט כירורגי ולאחר מכן להחיל משחה עיניים על עיניה כדי למנוע מהם להתייבש. לאחר מכן, לכסות את הבטן של העכבר עם שכבה עבה של קרם להסרת שיער. ואחרי כשלוש דקות, בעדינות לנגב את השמנת עם גזה ספוג 70% אתנול כדי להסיר את כל השיער.
לבסוף, לנגב את העור עם 70%אתנול, ואחריו 10% פתרון יודיד פוידון כדי להסיר את כל המזהמים ולחטא את העור. כדי להתחיל את הניתוח, ליצור עם אזמל חנק עור קו האמצע המשתרע מתהליך xiphoid אל הטבור. לאחר מכן באמצעות מלקחיים אדסון, להרים את צפק ולהפוך עם מספריים חור קו האמצע קטן.
להרחיב את החתך לאורך קו האמצע של צפק, כך אורך זהה לאורך של חתך העור. לאחר מכן, השתמש במפזרים קהים כדי למשוך את הכבד ולאחר חשיפת צינור המרה המשותף, מהדק אותו עם מהדק כלי דם בולדוג מעוקל. זהה את התריסריון ועם מלקחיים של ארוגה, שלף אותו החוצה בקדמת בטן כדי להציג את הפפילה הנראית כנקודה לבנה על פני השטח החיצוניים של החלק השני של התריסריון.
כדי לזהות את צינור הלבלב, למשוך את התריסריון caudly, ולאחר מכן למקם מחט 30-1/5 מד משיק לתריסריון ולעשות נקב על הקיר שלה ישירות מול הפפילה. כדי להחדיר את הפתרון, להציג את הקטטר מחובר משאבת עירוי דרך התריסריון שנוצר ולהחליק אותו לאורך הצינור עד שהוא גלוי בתוך כלי השיט, אבל מגיע לא יותר מסנטימטר אחד כדי למנוע עקיפת יובלים דביקים קלים. לשתק את הקטטר על ידי הידוק אותו עם מהדק כלי דם בולדוג מעוקל שני.
ואז להפעיל את המשאבה כדי ליזום את עירוי של 150 microliters של הפתרון לתוך הצינור. לאחר מכן, להזריק הצפק של העכבר כ 1.5 מיליליטר של תמיסת מלח כדי למנוע כל אובדן של נפח חדורים ולאחר מכן לכסות את המעי החשוף עם גזה לחה כדי למנוע התפלה. לאחר השלמת העירוי, לשחרר את הצנתר משותק באמצעות מהדק בולדוג, בעדינות להסיר אותו מצינור הלבלב.
ואז לשחרר את המהדק מצינור המרה המשותף. סגור את צפק ואת העור על ידי תפירה רציפה אותם בשכבה אחת ולנהל את הראשון מבין שתי מנות של משכך משכך, השני מהם יינתן למחרת. לאחר מכן להחזיר את העכבר לכלוב ממוקם תחת מנורת חום ולספק את החיה עם מזון ומים ad libitum.
התבונן בעכבר עד שהוא חזר להכרה מספקת המתבטאת בנסיגה חמורה. שבעה ימים לאחר הניתוח, הבלו מהלבלב החי המתת וכן מטחול, כבד ותריסריון המשמשים כפקדים. לטבול את כל הרקמות המבודדות בתמיסה paraformaldehyde 4% ולתקן אותם בארבע מעלות צלזיוס לילה.
לאחר הרקמות קבועות, קריו להגן על הדגימות על ידי השריית אותם בתמיסת 30% סוכרוז בארבע מעלות צלזיוס לילה. לאחר הגנה מפני הקפאה למשך הלילה, הצמד להקפיא את הדגימות בחנקן נוזלי באמצעות microtome, לחתוך קטעי רקמות בשישה מיקרומטרים. לבסוף, צלם את המקטעים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
מוצגות כאן תמונות מיקרוסקופיות של מקטעי לבלב שנקטעו מעכברים שבעה ימים לאחר ניתוח מזויף וחליטת צינור הלבלב של AAV8 הנושאת את הגן GFP. כבד, טחול ותריסריון מבודדים מהעכבר עם AAV8 לא הראו שום אות GFP בעוד הלבלב חשף ביטוי GFP בולט, המאשר משלוח ספציפי ללבלב של הנגיף לאחר עירוי צינור הלבלב. לאחר שליטה, טכניקה זו יכולה להיעשות ב 10 דקות כאשר מבוצע כראוי.
בעת ביצוע הליך זה, חשוב מאוד לבצע ניתוח זהיר ולעשות את התריסריון הקטן ביותר האפשרי להקדמה של הצנתר. לאחר התפתחותו, הטכניקה סללה את הדרך לחוקרים החוקרים את הלבלב לחקור מספר פתולוגיות המייסרת את האיבר, כולל דלקת לבלב כרונית, סוכרת וסרטן הלבלב הן במודלים של מכרסמים והן במודלים בעלי חיים גדולים יותר. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך הבנה טובה מאוד של איך הן ביעילות והן באופן סלקטיבי להחדיר את צינור הלבלב.
