这些方法可以帮助回答眼科领域的关键问题，如环小体增殖或迁移。这些过程的主要优点是它们提供了各种可视化选项。演示程序的将是卡琳·德雷西格和弗兰克·布利克斯特，两个博士后在我们的实验室。
为了使眼睛保持光亮，首先使用手术刀在大鼠眼睑中使后侧和前部的缝隙保持约 0.5 厘米。用钳子抓住眼睛，小心地向侧面倾斜，露出周围的组织。在结缔组织和肌肉组织中用解剖剪刀进行切口，使眼睛得到锻炼。
将眼睛短暂地放在4%甲醛和磷酸盐缓冲盐水中一至两分钟。在用手术刀尖施加轻压之前，先在角膜肢上打孔，然后用钠缓冲液短暂冲洗。用解剖剪刀切割角膜肢体，用钳子切除角膜和透镜。
将剩余的组织与视网膜一起吸收到PBS中4%甲醛中，两到四个小时。通过浸入索伦森含有10%蔗糖的磷酸盐缓冲液，然后吸收25%蔗糖，冷冻保护组织。一旦组织沉入容器底部，就将其转移。
嵌入雅祖拉介质中，用3%的明胶从猪皮和30%白素从蛋清准备。接下来，将明胶嵌入视网膜的10微米垂直冷冻切入视神经。将冷冻片放在玻璃滑梯上，至少干燥一小时。
干燥后，用 0.25%Triton-X 100 将幻灯片淹没在 PBS 中 15 分钟。然后，将PBST和1%BSA中1：100 PDGF受体β和1：500NG2原抗体的混合物滴到低温上，在4摄氏度的湿润室中过夜。第二天，将幻灯片浸入 PBST 中两次，每次 15 分钟，以清洗部分。
然后滴1：100抗小鼠Alexa Fluor 594链接和1：100抗兔 FITC链接的二次抗体的混合物，用3%BSA稀释在BST中，并在黑暗中孵育一小时。孵育后，每次在PBST中冲洗玻璃滑梯15分钟。使用含有 DAPI 和盖玻片的防褪色安装介质安装染色的低温。
第二种视网膜组织制备技术是全安装。切除角膜后，使用钳子的小开口运动将视网膜从视网膜色素上皮分离到视神经。用解剖剪刀释放视神经的视网膜，从视网膜外围向视神经头部开三到四条几毫米长的缝隙。
将视网膜铺在玻璃滑梯上，晾干5至10分钟。将4%甲醛滴到视网膜上，固定20至30分钟。固定后，使用 PBS 冲洗。
为了获得最佳效果，冲洗后直接进行免疫。首先，将PBST滴入整座，在室温下孵育15分钟。从PBST中倒出，然后加入原抗体溶液，在4摄氏度的湿润室中孵育。
第二天，倒掉原抗体，滴在PBST上，每次冲洗视网膜两次，每次15分钟。浇注第二次洗涤后，将二次抗体溶液滴到视网膜上，在黑暗中室温下在湿润室中孵育一小时。在二次抗体孵育后，与以前一样用PBST洗涤两次。
使用包含 DAPI 和盖滑的防褪色安装介质安装染色的整个安装。除了完全安装视网膜，视网膜血管可以通过低分位隔离来隔离。首先，将视网膜放在24井板中的一毫升去电化水中，在室温下以1.5毫米振动轨道以200 rpm转速摇动，持续一小时，然后加入200单位的DNAse 1，将视网膜血管中的落酸细胞碎片分离，在室温下再摇晃30分钟。
在去层水中冲洗视网膜三次，每次五分钟，以 150 至 300 rpm 的转速摇动，以清除神经元细胞碎片。每次冲洗时，视网膜应变得更透明，表示可去除神经元细胞碎片。冲洗后，在室温下将视网膜固定为4%甲醛和PBS的1毫升10分钟。
用 PBS 冲洗三次。如果继续免疫，用500微升10%驴血清在PBS中稀释1小时，在100转/小时时摇晃，阻断低分分离血管。阻断后，在600微升原抗体溶液中孵育视网膜，包括1：100PDGF受体β和1：500NG2原抗体，在10%驴血清和PBS中稀释。
第二天，在PBS中冲洗视网膜网络三次，每次五分钟，然后在1：100抗小鼠Alexa Fluor 594和1：100抗兔 FITC 相关二次抗体中孵育，在 10% 驴血清和 PBS 中稀释，在室温下以 100 rpm 摇动，在黑暗中摇动一小时。在 PBST 中洗涤 5 分钟后，每毫升 DAPI 和 PBST 孵育 0.2 毫微克 15 分钟。使用 PBST 清洗三次，五分钟，同时防止光线。
接下来，切割塑料巴斯德移液器的尖端。使用移液器尖端去除锋利的边缘，用 PBST 滋润巴斯德移液器，然后将视网膜血管吸入移液器并放入四孔玻璃室滑梯中。保湿步骤是重要的，以避免视网膜血管粘在巴斯德移液器内部。
通过来回倾斜腔室滑动来定位视网膜血管。从腔室滑轨的井中拆下介质。液体的表面张力会将血管压平到滑轨底部。
如果需要，将液体滴到视网膜血管上展开。在从室滑轨上取下塑料孔之前，确保在显微镜下正确展开。使用防褪色安装介质和盖滑来安装染色的血管。
NG2免疫组织化学揭示了视网膜内侧阳性的血管。箭头表示容器中的圆形和马蹄形免疫反应。箭头指出了一个纵向切割的容器。
PDGF受体β免疫组织化学显示与NG2相似的免疫反应。再次箭头和箭头指示容器中的免疫反应。此图显示了绿色 NG2 的合并，红色中的 PDGF 受体测试版和蓝色 DAPI 的合并。
通过叠加三种不同的滤波器，发现NG2和PDGF受体β是共同本地化的。此图显示了一个免疫染色全安装制剂与NG2染色为红色。免疫反应性沿着表面血管网络可见，在肺膜内有强烈的染色。
神经元细胞在NG2染色微血管之间以DAPI蓝色核可见。此图显示了低分位分离大鼠视网膜血管网络染色的NG2在绿色和PDGF受体β在红色。整个网络显示NG2免疫反应。
PDGF受体β免疫反应在细胞生长膜中发现。在较高的放大率下，很明显PDGF受体β染色只在血管网络中的细胞索马斯中看到，表明具有抗性免疫反应。将 DAPI 染色与 NG2 和 PDGF 受体 beta 一起显示此高放大图像中两个未定义的容器壁细胞中的三个周数。
按照这些程序，其他免疫染色，如平滑肌肉细胞或内皮染色可用于回答其他问题。例如，视网膜血管中的细胞在缺血之后看起来如何？
