o 型血管哺乳动物细胞产生均匀集料的轨道晃动培养

这种方法非常先进。它具有组织工程、免费生成疗法和药物筛选等生物技术领域的部门。这种技术的主要优点是，均匀尺寸的聚合体可以在简单的悬浮培养中产生。

该板代表新型O形容器在轨道震动悬浮培养中产生哺乳动物细胞均匀聚集的可能性。在轨道震动培养与常规容器中，循环流发生于中表面的离心力，这种介质流将细胞向容器的中底转移。这种效应是众所周知的爱因斯坦茶叶悖论。

这种效应导致细胞在细胞中心底部的过量积累和不均匀的聚合。另一方面，O形容器消除中心区域，防止中流将细胞扫入中心底部区域。这限制了可以实现同质聚合的细胞的积累。

从一个25平方厘米的 HEK-293 细胞瓶开始，每个容器都可就座。使用0.25%的特里普辛-EDTA溶液分离细胞，通过离心收集细胞。将产生的颗粒重新在一毫升培养培养中。

通过 40 微米细胞滤株过滤细胞悬浮液，收集单细胞悬浮液。将 Trypan 蓝色添加到细胞悬浮液的等分中，并执行细胞计数。然后准备20毫升的细胞悬浮液，每毫升2倍10至第5个细胞。

将 O 形袋的入口连接到夹紧的 50 毫升注射器，然后拆下柱塞。通过夹紧的注射器将准备好的细胞悬浮液放入 O 形袋中。用干净的注射器更换第一个夹紧注射器。

通过清洁注射器添加 55 毫升空气，以完全展开袋子。拍打进气管，然后关闭进气管。最后，从管子上取下夹子。

在35摄氏度和5%的二氧化碳条件下，以45转/分的速度孵育O形袋中的细胞。要改变细胞中的培养，首先通过入口将细胞悬浮液转移到50毫升管中。然后在室温下在200G下离心两分钟。

吸进上经剂后，加入20毫升培养，重新给细胞增殖。将重新暂停的细胞添加到 O 形袋中，并将密封的袋子返回到摇动的培养箱。要收集细胞，请像以前一样将细胞悬浮液转移到50毫升的管子中。

用20毫升钙、无镁磷酸盐缓冲盐水清洗袋内，然后将内装物排入管中，从袋中收集剩余的细胞。在室温下将收集的细胞悬浮液离心三分钟，在200倍G下，然后吸入超生。加入10毫升钙，无镁PBS，观察聚合。

离心后，像以前一样，去除超生，并留下含有集料的颗粒。如果需要细胞计数，将四毫升 PBS 和一毫升 Trypsin 添加到聚集体中，并在 37 摄氏度下孵育 10 分钟，以分离细胞进行计数。实验测量表明，在传统培养皿中生长的集料在轨道震动五天后直径不同。

相比之下，在O形盘子或袋子里生长五天的集料直径要均匀得多。根据基于图像的大小测量，传统菜培养表现出两个不同的峰值，表明总尺寸的偏差很大。另一方面，O形菜和O形袋中的集料比传统菜中的集料单峰和直径偏差较小，这表明这种集料的质量可能更均匀。

聚合横截面的血氧素和青霉素染色表明，传统菜中生长的集料具有一些去核细胞和坏死过程;然而，在O形血管中生长的集料没有显示出任何坏死过程，在O形袋中生长的集料与传统菜中生长的集料一样大。细胞计数显示，超过85%的细胞在每个容器中存活了五天的悬浮培养。本视频演示了如何处理新的 O 形容器，以在简单的悬浮培养中生产哺乳动物细胞的均匀位集料。