应用造血干细胞移植评估骨髓增生异常综合征的起源

此方法可以帮助回答恶性肿瘤方法领域的几个问题，即引发恶性肿瘤的细胞的表征。该技术的主要优点是，它为这些癌症干细胞的功能分析提供了基础。这种技术的影响延伸到骨髓增生综合征或MDS的治疗，因为它可以帮助识别疾病启动细胞。

为使接受者做好收养转移的准备，移植前一周，在特定的无病原体动物设施中，向生源性接受者动物提供每公升100毫克的无菌水，并辅以100毫克的柠檬黄沙星。第七天，有一个训练有素的、经过认证的17号操作员将钚源仪器设置为每分钟提供70个全身伽马辐照。将 10 只鼠标放在定制设计的支架中。

将支架插入辐照器室，在 13 分钟内提供 9 个灰色全身辐照。然后把动物还到笼子里。第二天早上，在整整两到六个飞蛾的旧C57黑色六只老鼠上喷洒70%的乙醇，用剪刀把皮肤从骨盆上取出到脚踝上。

用剪刀钳子去除毛骨和头骨。干净修剪骨骼的肌肉。切近端和端端的头骨，并拿起一个头骨与钳子。

将装有27根量具针头的三毫升注射器插入骨髓腔，将骨髓冲洗到14毫升圆形底部管中，内含2.5毫升的汉克斯缓冲盐水溶液，辅以2%的胎儿牛血清或HF2。当所有骨髓被收集后，通过20个量具针尖多次吸气组织，将骨髓质量分散成一个单一的悬浮液进行计数。要标记骨髓核细胞（BMNC）进行流分选，通过离心收集细胞，并在每90微升HF2浓度的10至第七BMNC下重新悬浮颗粒。

接下来，在4摄氏度下向细胞悬浮液中加入10微升生物素化、抗血统抗体鸡尾酒，进行20分钟的孵育。接着是离心机在三毫升PBS中清洗。将颗粒重新悬浮在 100 微升 HF2 中，每 10 次将颗粒悬浮到第七细胞中。

其次，用两个微升的PC结合抗生物素抗体标记细胞。在摄氏4度下20分钟后，在不受光线影响下，用三毫升新鲜PBS清洗细胞。重新悬浮HF2中的颗粒，并补充每毫升碘化二丙烯在冰上0.2微克。

现在，使用未污染的细胞校准流式细胞分拣机，以优化每个探测器线性范围内的所有光电倍增管、散射和荧光参数。为未标记、PI 标记和反血统 APC 标记的单元格获取 10，000 个单元格的三个样本。在排序结束时，分析每个样本中的1000个细胞，以确认已排序的细胞的纯度和可行性。

旋转离心机中的样品。然后将颗粒重新悬浮在 0.5 毫升 HF2 中进行计数。对于分类细胞的收养转移，在无菌HF2中，将100微升的2倍混合到第五野生型BMNC。

每只受助动物的100微升为2至5倍至第四，对无菌HF2的分类捐赠者BMNC感兴趣。加载一个毫升注射器，每个接受者配备28个量具，200微升细胞。然后，将接受小鼠放在热灯下，诱导尾静脉扩张。

通过尾静脉将细胞混合物传递到每个致命辐照的接受动物。由于干细胞自我更新仅限于血统阴性野生型BMNC，血统阴性、低血统阳性和高血统阳性细胞被分类并移植到野生型接收者中，以确定每个细胞种群的自我更新能力。从MDS模型动物采用移植的供体转遗传BMNC可以通过CD45.2细胞表面标记表达来区分外体。

在移植血统阴性BNMC或转基因MDS供体动物的未分类BMNC后16周，转基因细胞与野生细胞竞争，在致命辐照受援动物的外周血液中观察到的CD45.2阳性供体细胞比例增加就证明了这一点。在这里，从用转基因MDS细胞移植的小鼠的白血病转化细胞显示。注意存在许多爆炸和不成熟的形式。

在尝试该程序时，重要的是要记住限制外体操作的时间，因为它可能会给细胞造成不必要的压力，导致细胞死亡或功能丧失。这项技术开发后，为实地项目的研究人员铺平了道路，为基因工程小鼠的恶性肿瘤探索疾病来源铺平了道路。