利用隔离的完美大鼠小肠进行肠道激素分泌的机制

我们在这里开发的方法已经被证明是非常有用的，在我们的工作中，试图找出从肠道中分泌激素的分子机制，但也吸收营养物质，以及两者之间的耦合。这种高度生理技术的主要优点是肠道原位，同时允许详细的研究，通常只在体外模型内进行。首先将大鼠放在加热手术台上，确认对手趾捏没有反应，并做皮肤和腹膜切除以暴露腹腔。

将小肠移动到一侧以暴露结肠的终端区域。并给结肠的供给血管。逐渐提取结肠，从终端区域开始，向小肠移动，用同位素盐水使组织保湿，并必要时使用棉签去除结缔组织。

当所有结肠都被切除后，将一块15厘米的塑料管插入小肠流明的近端，用缝合线固定管子。然后使用10毫升注射器和注射器泵，以每分钟25毫升的流速用室温同位素盐水小心冲洗小肠。当组织被清空时，调整组织，使上肠动脉被访问，并去除结缔组织和脂肪组织，以暴露动脉。

使用细点钳将两个缝合线放在肠动脉下，在门户静脉下放置两个缝合线。用灌注缓冲液填充连接到滚动泵的塑料 22 量导管，并使用一把手术剪刀在肠动脉上切一个小孔，立即将导管插入切口。在动脉上切一个洞后两分钟内插入导管，否则肠道可能会遭受缺血性损伤。

一旦导管用缝合固定，启动滚动泵，以每分钟 7.5 毫升的流速启动灌注。当肠道和入口静脉的血管变得苍白时，在入口静脉上切一个洞。插入金属导管，用另一根缝合线固定金属导管。

将导管插入入口静脉时小心，因为静脉是薄壁。然而，由于护罩现在被注入，快速插入不是关键。收集灌注输出一分钟后，测量音量，在压力记录程序中单击执行实验，启动灌注压力采集记录。

然后用湿润的实验室组织覆盖肠道，防止其干燥，并确认肠道的远端没有阻塞，发光的倍体可以退出。为了测量氧气和二氧化碳的部分压力，在输液时间约三分钟后，立即通过三向止回式缓冲阀收集灌注缓冲液，然后从导管插入入口静脉。将样品放在冰上，并使用自动血气分析仪在采集样品后进行测量。

使用分数收集器获取第一个基线样本。经过10至15分钟的基线采集后，使用注射器泵以每分钟35毫升的流量，通过三向止血器，通过三路止压式兴奋剂进行管理。在刺激前五分钟以每分钟 2.5 毫升的流速进行初始刺激 Boas 注射，然后以每分钟 5 毫升的流速对测试溶液进行管理。

一旦发光刺激期结束，以每分钟 2.5 毫升的流速用同位素盐水冲洗流明五分钟。然后以每分钟5毫升的基准样本收集15至30分钟，然后施用下一个测试物质。在实验结束时，进行适当的阳性控制，以测试制备的响应能力5至10分钟，在阳性控制刺激期结束时收集和增加10至15分钟的基线样本。

下面是一个高质量的数据示例，演示了胰高血糖蛋白样肽-1或GLP-1，从每隔一分钟收集的隔离的感染大鼠小肠中分泌。在基础条件下，分泌物是稳定的，而在测试刺激和阳性控制管理之前和之后，一个有力的分泌反应是显而易见的。这些GLP-1分泌数据从孤立的富鼠小肠获得，质量较差，在基础条件下测量的不稳的分泌物在整个测试过程中向上漂移，似乎与测试物质管理或阳性控制无关。

因此，无法得出在血管果糖刺激结束时观察到的GLP-1分泌物是否为果糖中量反应的结论是无法得出的。在尝试此程序时，注意正确固定导管，并彻底清洁灌注设备，因为灌注缓冲液为细菌生长提供了极好的介质。按照这个程序，其他方法，如在体外研究激素分泌细胞系的初级肠道细胞培养，可以进行直接研究细胞内产生循环AMP或细胞内钙。

因此，我们已经使用的方法，现在阐明一些过程背后的吸收营养和激素的分泌机制，它被证明是非常有用的。不要忘记，使用分子位位阻滞剂或活化剂可能非常危险，并且在执行此过程时应始终使用实验室外套、手套和安全眼镜等预防措施。