Burada geliştirdiğimiz yöntem, bağırsaktan hormonların salgılanMasının moleküler mekanizmalarını, aynı zamanda besinlerin emilimini ve ikisi arasındaki bağlantıyı bulmak için çalışmamızda son derece yararlı olduğu ortaya çıktı. Bu son derece fizyolojik tekniğin en büyük avantajı bağırsak yerinde bırakılır, genellikle sadece In Vitro modelleri içinde yapılan ayrıntılı çalışmalar sağlarken. İlk ısıtmalı bir ameliyat masasına sıçan yerleştirin, parmak çimdik yanıt eksikliği onaylamak, ve karın boşluğu ortaya çıkarmak için bir deri ve periton eksizyonu yapmak.
Kolon terminal bölge ortaya çıkarmak için yan ince bağırsak taşıyın. Ve kolona tedarik eden vaskülatürü de hafifletin. Yavaş yavaş kolon ayıklayın, terminal bölgeden başlayarak, ve ince bağırsak doğru hareket, iyotonik salin ile doku nemlendirici, ve gerektiğinde bağ dokusu kaldırmak için pamuklu bezler kullanarak.
Tüm kolon kaldırıldı zaman, ince bağırsak lümenproksimal sonuna plastik boru 15 santimetrelik bir parça yerleştirin ve dikişler ile tüp güvenli. Sonra dikkatle oda sıcaklığında iyotonik tuzlu ile ince bağırsak yıkamak için 10 mililitrelik şırınga ve bir şırınga pompası kullanın 25-mililitre başına akış hızı. Doku şime boşaltıldı zaman, üst mezenterik arter erişilebilir böylece dokuları ayarlamak ve arter ortaya çıkarmak için bağ dokusu ve yağ dokusu kaldırın.
Mezenterik arter in altına iki dikiş ve portal ven altında iki dikiş yerleştirmek için ince nokta forceps kullanın. Perfüzyon tampon ile bir haddeleme pompası bağlı plastik 22-gauge kateter doldurun ve mezenterik arter küçük bir delik kesmek için cerrahi makas bir çift kullanın, hemen kesi içine kateter yerleştirerek. Arter bir delik kesme iki dakika içinde kateteri yerleştirin, aksi takdirde bağırsak büyük olasılıkla iskemik hasar muzdarip olacaktır.
Kateter bir dikişle sabitlendirin, dakikada 7,5 mililitre akış hızında perfüzyon başlatmak için haddeleme pompasını çalıştırın. Bağırsak ve portal ven kan damarları soluk açmak, portal ven bir delik kesti. Metal bir kateter yerleştirin ve metal kateteri başka bir dikişle sabitle.
Damar ince duvarlı olduğu için kateteri portal vene takarak dikkatli olalım. Ancak, bekçi şimdi perfüzyon ediliyor gibi, hızlı ekleme çok önemli değildir. Perfüzyon çıktısını bir dakika topladıktan sonra, perfüzyon basıncı edinme kayıtlarını başlatmak için ses düzeyini ölçün ve basınç kayıt programındaki yürütme deneyini tıklatın.
Sonra kurumasını engellemek için nemlendirilmiş bir laboratuvar dokusu ile bağırsak kapağı, ve bağırsak distal ucu bloke olmadığını onaylamak, ve bir luminal haploid çıkabilirsiniz. Oksijen ve karbondioksit kısmi basıncı ölçmek için, organ girmeden hemen önce üç yönlü stop-cock vana ile perfüzyon tampon toplamak, perfüzyon yaklaşık üç dakika sonra, ve portal ven içine yerleştirilen kateter. Örnekleri buza yerleştirin ve toplamadan hemen sonra örnekleri ölçmek için otomatik bir kan gazı analizörü kullanın.
İlk taban çizgisi örneklerini elde etmek için bir kesir toplayıcısı kullanın. Temel toplama 10 ila 15 dakika sonra, dakikada 35 mililitre akış hızı üç yönlü stop-cock ile ilk intraarteriyel test uyarıcı yönetmek için bir şırınga pompası kullanın. Stimülasyonun ilk beş dakikasında dakikada 2,5 mililitre akış hızında yapılan ilk stimülasyon boas enjeksiyonu ile luminal stimülasyonlar yapın ve ardından test solüsyonunun dakikada 5 mililitre akış hızında uygulanması nı bekleyin.
En kısa sürede bir luminal stimülasyon süresi sona ermez, beş dakika boyunca dakikada 2,5 mililitre akış hızı nda iyotonik salin ile lümen floş. Daha sonra bir sonraki test maddesi uygulanmadan önce 15 ila 30 dakika boyunca dakikada 5 mililitre temel numune toplayın. Deneyin sonunda, pozitif kontrol stimülasyon periyodunun sonunda 5 ila 10 dakika boyunca preparatın yanıt verme, toplama ve ek 10 ila 15 dakikalık temel numunelerin yanıt verme yeteneğini test etmek için uygun, pozitif bir kontrol uygulayın.
Burada glukagon benzeri peptid-1 veya GLP-1 gösteren, bir dakika aralıklarla toplanan izole perfüze sıçan ince bağırsak salgılanması gösteren, kaliteli veri bir örnek gösterilir. Bazal koşullar altında, salgı test uyarıcı ve pozitif kontrol yönetimi öncesi ve sonrası, sağlam bir salgı yanıtı belirgin iken sabit ti. İzole perfüzyon sıçan ince bağırsağı elde edilen bu GLP-1 salgı verileri, test maddesi yönetimleri veya pozitif kontrol ile ilgisiz bir şekilde test boyunca yukarı doğru sürüklenen bazal koşullarda ölçülen kararsız bir salgı ile düşük kalitededir.
Bu nedenle vasküler fruktoz stimülasyonu sonunda gözlenen artmış GLP-1 salgısının fruktoz aracılı bir yanıt olup olmadığı sonucuna varmak mümkün değildir. Bu prosedürü çalışırken kateterleri düzgün bir şekilde sabitlemek ve perfüzyon tamponu bakteri üremesi için mükemmel bir ortam sağladığından perfüzyon ekipmanını iyice temizlemek için özen göstermektedir. Bu prosedürü takiben, primer bağırsak hücre kültürlerinin hormon salgılayan hücre hatları üzerinde In Vitro çalışmaları gibi diğer yöntemler, doğrudan döngüsel AMP veya hücre içi kalsiyum hücre içi üretimini araştırmak için yapılabilir.
Bu yüzden bu yöntemi, besinlerin emilimini ve hormonların salgılanma mekanizmasının ardındaki bir dizi sürecin açıklanması için kullandık ve son derece yararlı olduğu ortaya çıktı. Moleküler alanların blokerleri veya aktivatörleri ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve laboratuvar önlüğü, eldiven ve güvenlik gözlüğü kullanmak gibi önlemlerin bu işlemi gerçekleştirirken her zaman bir duman başlığı nın alınması gerektiğini unutmayın.
