השיטה שפיתחנו כאן התבררה כמועילה ביותר בעבודה שלנו, בניסיון לגלות את המנגנונים המולקולריים של הפרשת הורמונים מהמעיים, אבל גם ספיגת חומרים מזינים, ואת הצימוד בין השניים. היתרון העיקרי של טכניקה פיזיולוגית גבוהה זו היא כי המעיים נשארים במקום, תוך מתן אפשרות מחקרים מפורטים המבוצעים בדרך כלל רק בתוך מודלים במבחנה. ראשית, מניחים את החולדה על שולחן ניתוחים מחומם, מאשרים חוסר תגובה לצביטת בוהן, ומפעילים כריתת עור וצבת כדי לחשוף את חלל הבטן.
להזיז את המעי הדק לצד כדי לחשוף את האזור המסוף של המעי הגס. וללקט את כלי הדם המספקים המעי הגס. בהדרגה לחלץ את המעי הגס, החל מאזור הטרמינל, נע לכיוון המעי הדק, לחות את הרקמה עם מלוחים איזוטוניים, ושימוש במטליות כותנה כדי להסיר את רקמת החיבור לפי הצורך.
כאשר כל המעי הגס הוסר, להכניס חתיכה 15 ס"מ של צינורות פלסטיק לתוך הקצה הפרוקסימלי של לומן מעיים קטן, ולאבטח את הצינורות עם תפרים. לאחר מכן השתמש במזרק 10 מיליליטר ומשאבת מזרק כדי לשטוף בזהירות את המעי הדק עם תמיסת מלח איזוטונית בטמפרטורת החדר בקצב זרימה של 25 מיליליטר לדקה. כאשר הרקמה התרוקנה של chyme, להתאים את הרקמות, כך העורק mesenteric העליון נגיש ולהסיר את רקמת החיבור ואת רקמת השומן כדי לחשוף את העורק.
השתמש במטלפי נקודה עדין כדי למקם שני תפרים מתחת לעורק mesenteric ושני תפרים מתחת לווריד הפורטל. מלאו קטטר פלסטיק 22-מד המחובר למשאבה מתגלגלת עם חיץ תדלוק ולהשתמש בזוג מספריים כירורגיים כדי לחתוך חור קטן בעזרה mesenteric, מיד החדרת קטטר לתוך החתך. הכנס את הקטטר בתוך שתי דקות של חיתוך חור בעורק, אחרת המעיים צפויים לסבול מנזק איסכמי.
ברגע שהקטטר אובטח בתפר, התחל את המשאבה המתגלגלת כדי ליזום חליטה בקצב זרימה של 7.5 מיליליטר לדקה. כאשר כלי הדם במעיים ובוריד השער הופכים חיוורים, חותכים חור בווריד השער. הכנס קטטר מתכת, ולאבטח את קטטר המתכת עם תפר אחר.
יש לדאוג בעת החדרת קטטר לתוך וריד הפורטל, כמו וריד דק מוקף חומה. עם זאת, כמו השומר הוא עכשיו להיות מנוון, הכנסה מהירה אינה קריטית. לאחר איסוף פלט תפוקת התדלוק לדקה אחת, למדוד את עוצמת הקול ולחץ לבצע ניסוי בתוכנית הקלטת הלחץ ליזום את הקלטות רכישת לחץ תדלוק.
לאחר מכן לכסות את המעיים עם רקמת מעבדה לחה כדי למנוע ממנו להתייבש, ולאשר כי הקצה הדיסטלי של המעי אינו חסום, ו haploid זוהר יכול לצאת. כדי למדוד את הלחץ החלקי של חמצן ופחמן דו חמצני, לאסוף חיץ תדלוק דרך שסתום עצירה-תרנגולי תלת כיווני מיד לפני שהוא נכנס לאיבר, לאחר כשלוש דקות של חליטה, ומהקטטר שהוכנס לווריד הפורטל. מניחים את הדגימות על קרח, ולהשתמש מנתח גז דם אוטומטי כדי למדוד את הדגימות זמן קצר לאחר איסוף.
השתמש במסוף שברים כדי להשיג את הדוגמאות הבסיסיות הראשונות. לאחר 10 עד 15 דקות של איסוף בסיסי, השתמש במשאבת מזרק כדי לנהל את ממריצי הבדיקה התוך-ארטיאלית הראשונה באמצעות עצירת ת'וק תלת-כיוון בקצב זרימה של 35 מיליליטר לדקה. בצע גירויים זוהרים על ידי הזרקת boas גירוי ראשוני נמסר בקצב זרימה של 2.5 מיליליטר לדקה במהלך חמש הדקות הראשונות של הגירוי, ואחריו ניהול של פתרון הבדיקה ב 5 מיליליטר לדקה קצב זרימה.
ברגע שתסתיים תקופת גירוי לומינלית, יש לשטוף את הלומן בתמיסת מלח איזוטונית בקצב זרימה של 2.5 מיליליטר לדקה למשך חמש דקות. לאחר מכן לאסוף דגימות בסיסיות ב 5 מיליליטר לדקה במשך 15 עד 30 דקות לפני חומר הבדיקה הבא מנוהל. בסוף הניסוי, לנהל מתאים, שליטה חיובית כדי לבדוק את ההיענות של ההכנה במשך חמש עד 10 דקות, איסוף ו 10 עד 15 דקות נוספות של דגימות בסיסיות בסוף תקופת גירוי שליטה חיובית.
להלן דוגמה לנתונים באיכות טובה, המדגימים פפטיד-1 דמוי גלוקגון או GLP-1, הפרשה ממעי דק מבודד של חולדה מנומקת שנאספה במרווחים של דקה אחת. בתנאים הבסיסיים, הפרשת היה יציב בעוד הן לפני ואחרי ניהול של גירוי הבדיקה ואת השליטה החיובית, תגובה הפרשה חזקה ניכרה. נתוני הפרשת GLP-1 אלה המתקבלים ממעי דק מבודד של חולדה מנוון הם באיכות ירודה עם הפרשה לא יציבה הנמדדת בתנאי בסיס שנסחפו כלפי מעלה לאורך כל הבדיקות באופן שנראה שאינו קשור לממשלי חומר הבדיקה או לשליטה החיובית.
לכן אי אפשר להסיק אם הפרשת GLP-1 המוגברת שנצפתה בסוף גירוי פרוקטוז כלי הדם הייתה תגובה מתווכה פרוקטוז. תוך כדי ניסיון הליך זה כדי לטפל כדי לאבטח את קטטרים כראוי כדי לנקות ביסודיות את ציוד חליטה כמו חיץ חליטה מספק מדיום מצוין לצמיחה חיידקית. בעקבות הליך זה, שיטות אחרות כמו In Vitro מחקרים על קווי תאים מפרישים הורמונים של תרכובות תאי מעיים ראשוניים, ניתן לבצע כדי לחקור ישירות את הייצור תאיים של AMP מחזורי או סידן תאי.
אז כבר השתמשנו בשיטה עכשיו להבהרה של מספר תהליכים מאחורי ספיגת חומרים מזינים ואת מנגנון הפרשת ההורמונים וזה התברר להיות מאוד שימושי. אל תשכח כי עבודה עם חוסמים או מפעילים של אתרים מולקולריים יכול להיות מסוכן מאוד אמצעי זהירות כגון שימוש במעיל מעבדה, כפפות, ומשקפי בטיחות, מכסה המנוע אדים תמיד צריך להילקח בעת ביצוע הליך זה.
