筛选抗内虫抗性棉基因型

该方法有助于改性线虫抗棉品种的发育。通过确定其他棉花品种的耐药基因型和繁殖种群的评价。该技术的主要优点是，它为重新形成线虫筛选提供了一种简单、无损的方法。

首先将一个棉花球放在直径四厘米的底部，每个种子21个中心高度锥形塑料锅。用蒸汽巴氏杀菌的土壤混合物填充锅，从锅的顶部大约两厘米。将塑料支点放入每个锅中，指定要种植的基因型，并在每个锅中种植一种相应相应棉花基因型的种子。

在每个盆中填充额外的土壤，以覆盖种子，并放置在一个生长室设置为28摄氏度的恒定温度与16小时的荧光和白炽灯光周期。然后将水排放器放入每个锅中，并使用自动浇水系统每天给锅浇水两次。种植七天后，在每种植物旁边的土壤中形成一个小凹陷，并在每个凹陷中加入一毫升的再造线虫悬浮液。

接种后，需要仔细控制锅水，以防止从根区清洗线虫。接种后28天，用剪刀从植物中去除大部分完全膨胀的叶子，然后挤压每个盆子，将土壤滑出一只手去掉植物。在10升容器中轻轻搅拌自来水中的根系，将土壤从根部中去除，然后用干净的自来水容器短暂冲洗。

使用剪刀将清洁的根系从土壤线以下约一厘米的植物中去除。将根放入塑料 120 毫升非无菌一次性样品容器中。接下来，用大约 30 毫升的红色食品着色溶液完全覆盖根系，将试样容器放入微波炉中加热染色溶液，直到开始沸腾。

当样品冷却到室温时，用100毫升自来水更换红色食品着色液，以去除多余的污渍。然后将盖子放在样品容器上，将样品储存在摄氏四度，直到根感染分析。为了恢复种子生产植物，将一袋棉花放在一个新的锥形塑料锅的底部，并部分填充泥炭苔盆栽介质。

将一根系收获的植物笋放在锅中，并牢固地加入盆栽介质来填充盆栽。将新标记的塑料支点放入每个锅中，以指定棉花基因型，将锅托盘放入水塑料容器中。给植物简单浇水，使盆栽湿润，将盆栽放在一个常温28摄氏度和16小时照片周期的生长室中。

大约 30 天后，将每个植物的塑料罐部分填充一个 6 升的盆栽。将每株植物转移到六升锅中，在种植每个苗木时，将每个盆栽的盆栽介质牢固地加入。然后将植物放在玻璃房子里，并加水来滋润盆栽介质。

要评估 R.reniformis 根感染，请从样本容器中去除根样本。使用立体显微镜计算在 20 倍放大倍率下连接到根系的雌线虫数量。成功的线虫根系感染可能受到多种因素的影响，包括用于接种的线虫的生存能力和季节性变化，因为线虫在冬季不太活跃。

然后将根系放在纸巾上约 10 分钟，以去除多余的水分。称量根系以确定新鲜根重量。根生长的变化是切除之间的共同。

这些变化，根据新鲜根部重量测量，也可以观察到相同基因型的植物之间。与易感基因型相比，能够建立抗性棉花基因型的雌性再造线虫相对较少。新鲜根部重量数据可用于计算每个基因型每克根组织的女性再造线虫数。

抗基因型每克根的雌性再造线虫数量通常小于10个，而易感基因型通常每克根的线虫数通常大于30个线虫。此处显示了来自包含 300 种植物的隔离 F2 总体的数据子集。在线虫评估中，通常观察到根系根生长和线虫感染的变异范围，说明这一程序在单个实验中用于筛选大量植物的能力，以尽量减少这种变异，并促进对耐药性遗传学的准确评估。

按照这个程序，可以确定重新形成线虫耐药性的遗传学，以确定与耐药性相关的DNA标记。然后，这些标记可用于标记辅助育种和线虫抗性对高地棉花的转移。开发后，该技术为研究人员在线虫再筛选后恢复植物提供了一种无损的方法，以帮助培育耐药棉品种。