이 방법은 리폼 선충성 내성 면 품종의 개발에 도움이 될 수 있습니다. 다른 면종으로부터의 내성 유전자형 의 식별과 번식 인구의 평가를 통해. 이 기술의 주요 장점은 리폼 선충 검사에 대한 간단하고 비파괴적 인 방법을 제공한다는 것입니다.
먼저 직경 4센티미터, 시드당 21개의 중심 높이 원뿔 플라스틱 냄비 의 바닥에 면공을 놓는 것으로 시작합니다. 그리고 냄비의 상단에서 약 2 센티미터에 증기 저온 살균 토양 혼합물냄비를 채웁니다. 각 냄비에 플라스틱 스테이크를 넣고 각 냄비에 적절한 면 유전자형의 한 씨를 심고 심을 유전자형을 지정합니다.
각 냄비에 씨앗을 덮고 16 시간 형광 및 백열 램프 사진 기간으로 섭씨 28도의 일정한 온도로 설정된 성장 챔버에 냄비를 놓습니다. 그런 다음 물 방출기를 각 냄비에 넣고 자동 급수 시스템을 사용하여 냄비에 매일 두 번 물을 넣습니다. 심기 7 일 후, 각 식물 옆에 있는 토양에 작은 우울증을 만들고 각 우울증에 1 밀리리터의 리폼 선충 현탁액을 추가합니다.
접종 후, 냄비 물은 뿌리 영역에서 선충을 세척하지 않도록 주의 깊게 제어할 필요가 있다. 접종 후 28 일, 각 냄비를 짜내고 식물을 제거하기 위해 한 손으로 토양을 슬라이딩하기 전에 식물에서 완전히 확장 된 잎의 대부분을 제거하기 위해 가위를 사용합니다. 뿌리에서 토양을 제거하기 위해 10 리터 용기에 수돗물에 뿌리를 부드럽게 동요하고 깨끗한 수돗물 용기에 잠시 헹구십시오.
가위를 사용하여 토양 선 아래 약 1센티미터 떨어진 식물에서 청소된 뿌리 시스템을 제거합니다. 뿌리를 플라스틱 120 밀리리터 비멸 일회용 시편 용기에 넣습니다. 다음으로, 붉은 음식 착색 액의 약 30 밀리리터로 뿌리 시스템을 완전히 덮고 끓기 시작할 때까지 염색 용액의 가열을 위해 시편 용기를 전자 레인지에 놓습니다.
시료가 실온으로 냉각되면 붉은 식품 착색 액을 100 밀리리터의 수돗물로 교체하여 과도한 얼룩을 제거하십시오. 그런 다음 덮개를 시편 용기에 놓고 뿌리 감염 분석이 될 때까지 샘플을 섭씨 4도에 보관하십시오. 종자 생산을 위해 식물을 복구하려면 새로운 원물 플라스틱 냄비 의 바닥에 면공을 놓고 냄비를 토탄 이끼 포팅 매체로 부분적으로 채웁니다.
냄비에 식물 촬영을 수확 한 루트 시스템을 배치하고 단단히 냄비 매체를 추가하여 냄비를 채웁니다. 각 냄비에 새 라벨이 붙은 플라스틱 스테이크를 놓고 면 유전자형을 지정하고 냄비 트레이를 플라스틱 물 용기에 넣습니다. 식물에 물을 주면 화분 매체를 적시고 28도의 일정한 온도와 16 시간의 사진 기간으로 설정된 성장 챔버에 냄비를 놓습니다.
약 30일 후에 식물당 6리터 플라스틱 냄비를 포팅 매체로 부분적으로 채웁니다. 각 식물을 6리터 냄비로 옮기고 각 모종을 심을 때 각 냄비에 포팅 매체를 단단히 추가합니다. 그런 다음 유리 집에 식물을 놓고 물을 추가하여 화분 매체를 적시합니다.
R.reniformis 루트 감염을 평가하려면 시편 용기에서 루트 샘플을 제거합니다. 스테레오 현미경을 사용하여 20배 배율 미만의 뿌리 시스템에 부착된 여성 선충의 수를 계산합니다. 선충이 겨울 개월 동안 덜 활성화되기 때문에 성공적인 선충 근 시스템 감염은 접종 및 계절 변이에 사용되는 선충의 생존가능성을 포함하여 여러 요인에 의해 영향을 받을 수 있습니다.
그런 다음 루트 시스템을 종이 타월에 약 10분 동안 배치하여 과도한 수분을 제거합니다. 루트 시스템의 무게를 측정하여 신선한 루트 중량을 결정합니다. 뿌리 성장의 변화는 절제 사이에 일반적입니다.
이러한 변화는 신선한 뿌리 무게로 측정되는 바와 같이 동일한 유전자형의 식물 간에도 관찰될 수 있습니다. 상대적으로 적은 여성 리폼 선충은 취약한 유전자형에 비해 내성 면 유전자형을 위한 공급 부위를 설정할 수 있다. 신선한 루트 중량 데이터는 각 유전자형에 대한 루트 조직의 그램 당 여성 리폼 선충의 수를 계산하는 데 사용할 수 있습니다.
저항하는 유전자형을 위한 뿌리의 그램 당 여성 reniform 선충의 수는 일반적으로 10 미만인 반면, 취약한 유전자형은 일반적으로 뿌리의 그램 당 30 개 이상의 선충을 가지고 있습니다. 여기서, 300개의 식물을 포함하는 분리F2 집단의 데이터 하위 집합이 표시됩니다. 루트 시스템의 루트 성장 및 선충 감염에 대한 이러한 범위는 일반적으로 선충 평가를 위해 관찰되며, 단일 실험에서 많은 수의 식물을 선별하는 데 사용되는 이 절차의 능력을 설명하며, 이러한 변화를 최소화하고 저항의 유전학에 대한 정확한 평가를 용이하게 한다.
이 절차에 따라, 리폼 선충성 저항의 유전학은 저항과 관련되었던 DNA 마커를 확인하기 위하여 결정될 수 있습니다. 이러한 마커는 마커 보조 번식과 고지 면에 선충저항의 전달에 사용할 수 있습니다. 개발 후, 이 기술은 연구원이 내성 면 품종의 번식을 돕기 위해 선충 재 검진 후 식물을 복구 할 수 있도록비 파괴적 인 방법을 제공했다.
