Bu yöntem, nematode dirençli pamuk çeşitlerinin yenilenmis gelişiminde yardımcı olabilir. Diğer pamuk türlerine dirençli genotiplerin belirlenmesi ve üreme popülasyonlarının değerlendirilmesi yoluyla. Bu tekniğin en büyük avantajı, nematod taraması için basit ve zararsız bir yöntem sunmasıdır.
Bir dört santimetre çapında, tohum başına 21 merkezi yüksekliği konik plastik tencerenin altına pamuk bir top yerleştirerek başlayın. Ve tencerenin üst kısmından yaklaşık iki santimetre buhar pastörize toprak karışımı ile tencere doldurma. Dikilecek genotip atfederek her pota plastik bir kazık yerleştirin ve her pota uygun pamuk genotip bir tohum bitki.
Tohum kapsayacak şekilde ek toprak ile her pot doldurun ve 16 saat floresan ve akkor lamba fotoğraf dönemi ile 28 santigrat derece sabit sıcaklık tagibi ayarlanmış bir büyüme odasında tencere yerleştirin. Sonra her tencereye su yayıcılar yerleştirin ve günde iki kez tencere su için otomatik bir sulama sistemi kullanın. Dikimden yedi gün sonra, her bitkinin yanındaki toprakta küçük bir depresyon oluşturun ve her depresyona bir mililitre reniform nematod süspansiyon ekleyin.
Aşılamadan sonra, kök bölgesinden nematodların yıkanmasını önlemek için pot suyunun dikkatlice kontrol edilmesi gerekir. Aşılamadan 28 gün sonra, her bir tencereyi sıkmadan ve toprağı tek bir elde kaydırarak bitkileri çıkarmadan önce bitkilerden tamamen genişletilmiş yaprakların çoğunu çıkarmak için makas kullanın. Yavaşça kök sistemi musluk suyu 10 litrelik bir kapta kökleri toprak kaldırmak için, temiz musluk suyu bir kapta kısa bir durulama takip çalkalayın.
Temizlenmiş kök sistemini toprak çizgisinin yaklaşık bir santimetre altında bitkiden çıkarmak için makas kullanın. Kökleri plastik 120 mililitre steril olmayan tek kullanımlık numune kabına yerleştirin. Daha sonra, yaklaşık 30 mililitre kırmızı gıda boyama çözeltisi ile kök sistemini tamamen kapatın ve numune kabını kaynamaya başlayana kadar boyama çözeltisinin ısıtılması için mikrodalga fırına yerleştirin.
Numune oda sıcaklığına soğuduğunda, fazla lekeyi gidermek için kırmızı gıda boyama solüsyonunu 100 mililitre musluk suyuyla değiştirin. Daha sonra kapağı numune kabına yerleştirin ve kök enfeksiyonu analizine kadar numuneyi dört derece santigrat derecede saklayın. Tohum üretimi için bitkiler kurtarmak için, yeni bir konik plastik tencerenin altına pamuk bir top yerleştirin ve kısmen turba yosun çömlekçilik orta ile pot doldurun.
Tencerede hasat ve bitkisel ateş bir kök sistemi yerleştirin ve sıkıca pota doldurmak için çömlekçilik orta ekleyin. Pamuk genotip belirlemek için her tencereiçine yeni bir etiketli plastik kazık yerleştirin ve su plastik bir kap içine tencere tepsi yerleştirin. Kısaca içme ortamı nemlendirmek için bitkiler su ve 28 derece santigrat sabit bir sıcaklık ve 16 saatlik fotoğraf süresi ayarlanmış bir büyüme odasında tencere yerleştirin.
Yaklaşık 30 gün sonra, kısmen çömlekçilik orta ile bitki başına bir altı litre plastik pot doldurun. Her bitkiyi altı litrelik bir tencereye aktarın, her bir fide dikilirken her tencereye çömlekçilik ortamı ekleyin. Sonra cam bir evde bitkiler yerleştirin ve çömlekçilik orta nemlendirmek için su ekleyin.
R.reniformis kök enfeksiyonunu değerlendirmek için numune kabından bir kök örneği çıkarın. 20X büyütme altında kök sistemine bağlı kadın nematodlarının sayısını saymak için stereo mikroskop kullanın. Başarılı bir nematod kök sistemi enfeksiyonu, nematodların kış aylarında daha az aktif olması nedeniyle aşılama ve mevsimsel varyasyon için kullanılan nematodun canlılığı da dahil olmak üzere çeşitli faktörlerden etkilenebilir.
Daha sonra fazla nemi gidermek için yaklaşık 10 dakika kağıt havlu üzerine kök sistemi yerleştirin. Taze kök ağırlığını belirlemek için kök sistemini tartın. Kök büyümesindeki değişimler eksizyonlar arasında yaygındır.
Bu varyasyonlar, taze kök ağırlığı ile ölçüldüğü gibi, aynı genotipteki bitkiler arasında da görülebilir. Nispeten daha az kadın reniform nematods duyarlı genotip göre dirençli pamuk genotip için bir besleme sitesi kurmak edebiliyoruz. Taze kök ağırlığı verileri her genotip için kök dokusunun gram başına kadın reniform nematodsayısını hesaplamak için kullanılabilir.
Dirençli genotipler için kök gram başına kadın reniform nematodların sayısı genellikle 10'dan az, duyarlı genotipler ise genellikle kök gram başına 30 nematod daha fazla var. Burada, 300 bitkiiçeren ayrı bir F2 popülasyonundan elde edilen bir veri alt kümesi gösterilmiştir. Kök büyümesi ve kök sistemlerinin nematod enfeksiyonu için varyasyon bu aralıkları yaygın nematod değerlendirmeler için gözlenen, tek bir deneyde bitkilerin çok sayıda tarama için kullanılacak bu prosedürün yeteneğini gösteren, bu varyasyonu en aza indirmek için, ve direnç genetik doğru bir değerlendirme kolaylaştırmak için.
Bu işlemden sonra, reniform nematod direnci genetik direnç ile ilişkili DNA belirteçleri belirlemek için tespit edilebilir. Bu belirteçler daha sonra marker destekli ıslah ıslahı ve nematod direncinin yayla pamuğuna aktarılması için kullanılabilir. Bu teknik, geliştirilmesinden sonra, araştırmacıların nematod re-screening sonrası dirençli pamuk çeşitlerinin ıslahına yardımcı olmak için bitkileri kurtarmalarına olanak sağlayan tahribatsız bir yöntem sunmayı sağlamıştır.
