利用笼子分子胶作为可活性标记的活细胞中的贵宾的时空控制核移位

此方法可以帮助回答药物输送领域的关键问题，例如如何向特定的细胞粒细胞提供药物。该技术的主要优点是气体的核转移可以通过光引起。演示程序将是丽娜 · 莫加基和秋叶子 · 阿里萨卡， 我小组的毕业生。

开始准备量子点链接笼分子胶通过合成笼状分子胶链接二苯环环素，如在其他地方更详细地描述。在干DMSO中准备笼状分子胶连接二苯并环环的10毫摩尔库存溶液。然后准备量子点链接笼状分子胶，首先使阿西眼功能化量子点。

为此，在 DMF 中向包含 500 纳米摩尔的量子点的 DMF 溶液中添加 100 微升 125 微摩尔 aseye PEG4 NHS 酯，这些溶液涂有胺功能化挂钩。在室温下搅拌混合物一小时。将所得溶液放在再生的纤维素膜中，对800毫升DMF进行24小时透析。

接下来，将笼状分子胶的库存溶液与DDMF连接50微摩尔，并在透析后溶液中加入200微升。在室温下搅拌混合物三小时。然后使用再生的纤维素膜对800毫升新鲜DMF进行24小时对，分子量切断25000。

24 小时后，用 DMF 将所得溶液稀释至 200 纳米摩尔。在标准培养条件下，在 Eagle 的最小基本介质中维护人类肝细胞癌 HEP3 B 细胞，其中含有 10%FBS。实验前一天，将5000个 HEP3 B 细胞的种子在 200 微升培养基中放入 8 室玻璃滑梯的每个井中。

然后盖住幻灯片，将其放入孵化器 24 小时。第二天取出培养培养剂，用100微升预热PBS冲洗细胞两次。在8室滑轨的每个井中加入200微升的FBS自由介质，其中含有10微摩尔的荧光染色笼状分子胶。

孵育3小时后，取出培养培养剂，用100微升PBS冲洗细胞样品两次。为了可视化，内糖体添加200微升培养培养媒体，其中包含100纳米摩尔的额外红色荧光染料，如LysoTracker Red。孵育产生的细胞样本20分钟。

然后取出培养介质，用100微升PBS冲洗细胞样品两次。之后，将细胞返回培养培养的200微升。为了诱导荧光染色笼状分子胶的核转移，将细胞放在装有365纳米带通滤波器的100瓦Xenon光源下。

将细胞暴露在紫外线下 2 分钟。在此期间，保持控制细胞样本在黑暗中无紫外线照射。玻璃基板的盖子可以取下，以有效进行紫外线照射，但要小心，因为长时间暴露在紫外线下可能会导致细胞死亡。

为了可视化，核在培养基中加入一个微升的霍斯特染色剂。孵育产生的细胞样本10分钟。然后将样品放在共和激光扫描显微镜的舞台上。

记录荧光染色笼状分子胶、LysoTracker Red 和核污渍的显微图。如前所述，种子5000人类肝细胞癌 HEP3 B 细胞进入每个井的 8 井室滑动和培养在标准条件下 24 小时。向细胞样品提供含有荧光染色笼状分子胶的200微升FBS自由培养介质。

孵育产生的细胞样本3小时。然后取出培养介质，用100微升PBS冲洗细胞样品两次。将细胞返回200微升的培养介质。

然后接受样品共和激光扫描显微镜，并记录下所附文本协议中描述的显微图。如前所述，种子5000人肝细胞癌 HEP3 B 细胞进入每个井的 8 井室滑动和培养在标准条件下 24 小时。向细胞样品提供200微升FBS自由培养介质，其中含有10纳米摩尔的量子点链接笼状分子胶。

孵育产生的细胞样本3小时。然后取出介质，用 100 微升 PBS 冲洗细胞样品两次。冲洗细胞后，将它们返回到培养基的200微升。

然后将板放在配备 365 纳米带通滤波器的 100 瓦 Xenon 光源下。将细胞样品暴露在紫外光下 2 分钟，使控制样品保持黑暗。为了可视化，核在培养基中加入1微升的霍赫斯特染色剂。

孵育产生的细胞样本10分钟。然后使用共和激光扫描显微镜对细胞进行成像。在实验前一天，将人类肝细胞癌 HEP3 B 细胞以每井 5000 个细胞种子到 96 井培养板中。

然后用200微升培养的培养剂覆盖细胞，然后将盘子放在培养箱中24小时。第二天取出培养培养剂，用100微升PBS冲洗细胞样品两次。然后加入200微升FBS自由培养介质，含有荧光染色笼状分子胶，浓度在0.1至100微摩尔。

孵育板3小时，然后将板放在UV光源下。将细胞样品暴露在紫外光下 2 分钟，使控制样品保持黑暗。在细胞计数试剂的10微升下紫外线照射到培养基，并孵育产生的细胞样本2小时。

然后使用微孔板读卡器读取样品在 450 纳米的吸收量。在照片辐射之前，用荧光染色笼状分子胶孵育的 HEP3 B 细胞从内部显示双核荧光发射，一个类似的显微图显示 LysoTracker Red 表明荧光染色笼状分子胶在内含体中局部化。因此，在紫外线辐射之前，在细胞核外观察到可分配给荧光染色笼状分子胶的荧光发射。

紫外线辐射后，荧光表明荧光染色笼状分子胶被解开并迁移到细胞质和细胞核。这种荧光染色笼状分子胶的核翻译可以通过近红外光选择性地诱导。在非辐照区域，荧光染色的笼状分子胶没有从内分体中逸出，并且仍然作为双核荧光。

树突笼状分子胶标签也可以将大分子像量子点等大分子进入细胞核。这些结合物可以进入细胞，在紫外线照射2分钟后，量子点的荧光发射可以在细胞核内看到。这一技术得到发展，为基因治疗领域的研究人员探索低副作用治疗铺平了道路。