味觉信号蛋白废除对炎症性肠病小鼠肠道炎症的影响

这种方法可以帮助回答炎症性生物疾病领域有关溃疡性结肠炎和克罗恩病的关键问题。该技术的主要优点是，它可以用来评估信号蛋白的第一个抗和亲作用。该技术的含义扩展了气体在新进展和炎症中的调查。

虽然这种方法可以提供对肠道炎症的遗传效应的见解。它也可以应用于其他因素，如饮食和微生物群。一般来说，这个学期的新鲜人会挣扎，因为治疗疾病疤痕组织是棘手的。

这种方法的视觉演示是至关重要的，因为解剖和组织准备步骤是很难学习的，因为肿瘤和细胞组织结构可能会改变。要诱导硫酸钠或DDS结肠炎，用3%DSS溶液代替普通饮用水，加入7天。每天测量每只老鼠的体重、DSS 溶液的消耗量和粪便生产。

在七天治疗结束时，将鼠标放在苏皮位置，用小剪刀在腹部做一个三厘米长的中线切口。收获脾脏并测量其大小。然后使用钳子提起结肠，以便将其与周围的肠胃分离。

提取整个结肠，直到切库姆和直肠可见。在结肠边缘的转流组织。和骨盆深处分别释放近位和近结。

测量并记录隔离冒号的长度。并使用装有格瓦奇针的 10 毫升注射器用 10 毫升的冰冷 PBS 冲洗结肠，以去除粪便和血液，直到病菌运行清楚。对于组织学鉴定，将组织样本分成大小相等的近位、中间和近面部分。

在4摄氏度下将组织在4%的甲醛中过夜。对于分离的结肠组织的血氧素和 eosin 染色，第二天早上，将组织片中 30%蔗糖和 PBS 中过夜地淹没在单独的 15 毫升管中，用于对样品进行低温保护。第二天，将组织嵌入最佳切割温度或 OCT 化合物中。

在零下20摄氏度下冷却组织，直到奥克百年变硬。将 OCT 块放在低温器中，将厚度表盘设置为 12 微米。然后将 12 微米厚的冷冻部分切片并收集到玻璃显微镜幻灯片上。

当所有组织都切块后，在热板上加热65摄氏度的滑梯20分钟。在用赤氧林染色溶液染色五分钟之前，先在蒸馏水中短暂清洗加热部分。去除多余的赤氧树脂溶液，在自来水中运行五分钟。

区分乙醇中0.5%盐酸的部分30秒，然后用自来水冲洗1分钟。接下来，在 PBS 中清洗样品一分钟。接着在自来水下再洗五分钟。

在洗涤结束时，将组织浸入上升乙醇系列中，每次浸入10秒。接着是 eosin 的反污了两分钟。对于样品的脱水，将滑梯浸入95%乙醇和两次100%乙醇的改变，每浸5分钟。

接着清除了二甲苯的两分五分钟的变化。然后对每个实验组的近结、中间结肠和近结的组织损伤进行评分。对于免疫石化学分析，在热板上加热部分20分钟后，在PBS中清洗幻灯片三次，每次洗涤10分钟。

通过10分钟3%过氧化氢孵育，消除内源性过氧化物酶。在孵化结束时，如演示，在 PBS 中清洗样品三次，并在室温下用阻塞缓冲液阻止任何非特异性结合至少一小时。然后，用感兴趣的原抗体鸡尾酒替换阻塞缓冲液。

在4摄氏度下过夜孵育。第二天早上，吸出多余的原抗体溶液，并在PBS中洗三次幻灯片。最后一次洗涤后，用适当的生物基化二次抗体鸡尾酒孵育幻灯片。

其次是在室温下用斯特雷普他丁马萝卜过氧化物酶复合物标记。要可视化免疫反应细胞，请用 DAB 标记样品，直到形成浅棕色或深棕色。用赤氧林和0.3%稀释氨来对抗这些部分。

当幻灯片干燥后，使用光学显微镜在 10 倍放大倍率下获取组织部分的明亮场图像。并使用图像处理程序来识别和量化上皮和层状丙体中标记的免疫细胞的数量。对于 DSS 治疗结肠的基因表达分析，根据标准 RNA 提取方案，从零下 80 摄氏度解冻的结肠组织样本中提取 RNA。

并混合一微克与总RNA与2.5微升20毫摩尔寡氧胺12至18个底土和1微升莫洛尼穆林白血病病毒逆转录酶。在42摄氏度下孵育60分钟后，将cDNA的一微升与0.5%的合适前向和反向定量PCR底板混合，用于感兴趣的细胞因子和2倍荧光绿色染料。然后在适当的参数下运行定量PCR，根据标准协议计算相对基因表达。

与野生型小鼠相比，α阵风霉素敲除小鼠表现出更严重的结肠炎，体重过度减轻，腹泻和肠道出血。经过七天的DSS施用后，对结肠部分的组织学分析表明，与野生型小鼠相比，敲鼠的近位、中号和近结结肠内组织损伤更加严重。这种过度的免疫活化导致结肠炎的诱导，免疫组织化学分析观察到，各种炎症细胞在敲除动物结肠中具有强大的渗透作用。

此外，定量PCR分析表明，与野生型小鼠结肠相比，TNF alpha和不鱼伽玛表达水平较高，但IL-5、10和13的表达较低，在TGF beta一个表达中没有差异。在尝试此过程时，重要的是要记住优化文本南瓦钠剂量和示范持续时间。转发这个程序，其他方法，如获得培养，以了解其他问题，如炎症在肠道组织起源的影响。

在它的发展之后，这项技术为肠道炎症领域的研究人员探索基因突变对生物疾病侵蚀和其他脊椎动物的严重程度的贡献铺平了道路。不要忘记，与疾病肠道组织及其内容工作可能是极其危险的，并影响，如穿的东西是适当的，个人保护永久应该始终采取，而执行这个程序。