利用卡尔瓦里亚共同培养和教条法测量骨重塑和再造肿瘤-骨微环境

此过程的目的是有一个外体模型，以评估骨重塑，并使用 calvaria 培养物或与癌细胞共同培养肿瘤骨微环境。大多数钙质技术是一种器官培养系统，使用新生儿小鼠的钙质骨来评估骨骼重塑。您可以测试不同分子的治疗潜力，甚至结合癌细胞使用骨肿瘤微环境。

所有这一切在一个简单和简单的测定在短时间内和低成本。该技术的目的是利用小鼠卡路里器官培养的外体模型，利用癌症骨骼微环境评估骨再生的工具。首先，选择一只老鼠小狗，然后把它放在引擎盖下。

我们使用从五到七天大的老鼠幼崽的卡瓦里亚。用注射器拿头，切开皮肤，清除头皮区域，足以解剖钙。确定头骨、下垂、日冕和羔羊的缝合线。

沿着羔羊缝合线做一个笔直的切口，大约在眼睛的水平。切在每一边，从羊皮缝合线到日冕缝合线。在 45 角度下，再进行一次切割，以连接与前部字体的切口进行切割的切口。

定义头骨缝合线、下垂、前冠、冠状体、羔羊类，以保证正确的组织内含和组织学分析，是极其重要的。用细尖钳，取出卡瓦里亚，并把它放在培养皿盖上。用手术刀，沿着下垂缝合线沿着下垂缝合线从后牙线直接切割，穿过日冕缝合线。

获得两个半方面变量。用钳子选取每个卡瓦里亚，并把它们放在一个新的培养皿与PBS。对于培养，将下摆放在24井组织培养板中，含有1毫升培养剂，并在37度下孵育24小时。

我们还可以使用原发性钙质培养物来再现肿瘤骨微环境，用于骨吸收。为此，我们与癌细胞或癌细胞的调节介质共同培养钙。24 小时后，卸下介质并将其替换为包含您要测试的处理效果的介质。

如果你想评估癌细胞和骨相互作用，或重新创建肿瘤骨微环境，将钙质传递到低细胞附着板，以避免癌细胞附着在板上。对癌细胞进行分析，数一数，并小心地将它们放在半膜体的顶部。您也可以使用来自癌细胞的条件介质，并用它来孵化下摆。

在37度下孵育6至7天，二氧化碳占5%。第三天，更换介质，继续孵化。在共培养中使用的细胞数量取决于癌症细胞线。

首先，您需要优化在一个单元格中诱导响应所需的单元格数。培养后，卡瓦里亚通过固定、脱钙和石蜡嵌入的过程。此外，组织被分切在微原子中，染色，并进行组织形态分析。

包含卡瓦里亚可能比较棘手。为确保组织在内含过程中受到保护，您可以将组织放在海绵之间，或使用纸巾或其他吸水纸，然后再将其放入盒式磁带中。对于组织加工，用纸巾包装下半膜。

然后，将其放入嵌入盒中，并在正式状态的中性缓冲区中固定，在四度下 24 小时。要对卡瓦里亚进行脱钙，请将盒式磁带放入 10%EDTA 中，在四度下 48 小时。在自动组织处理器中使用半圆锥形处理组织盒。

遵循常规的一天旋转周期，然后，包括在石蜡中。对于分切，用显微原子切割四个微分部分，将截面安装到玻璃显微镜幻灯片上，用赤氧树脂素、eosin进行染色。组织学分析用于对骨骼表面和骨骼重塑区域进行定量分析。

使用成像软件对7天中钙的影像进行了分析。对于定量评估，首先，定义分析区域。查看 telopa 上的部分，其中四个 X 可以确定方向和缝合线。

定义日冕缝合线，并识别一侧的长骨表面，然后识别另一侧的短面。在40X放大倍率下，识别日冕缝合线，沿着长表面将两到三个光场移离缝合线。捕获此区域的图像以进行分析。

您可以使用图像软件来分析骨骼的结构完整性。可以对半角体厚度和骨骼面积进行定量组织形态分析。正确的 calvaria 分析取决于良好的嵌入和正确的方向，以取得一致的组织学结果。

确保每个实验条件至少使用三个卡路里。在这里，我们可以看到骨骼的结构。在橙色中，观察到骨骼。

我们还可以看到周分、骨质疏松、内分泌和骨骼其他部位的存在。在我们的案例中，我们使用胰岛素来增加骨骼重塑。与控件相比，我们可以看到骨骼面积显著增加。

在这里，我们可以看到MDA-MB-231细胞系对模型卡尔瓦里亚的影响。与控制相比，我们可以看到癌细胞的存在会诱发刺激骨骼破坏的骨解因子。我们使用 calvaria 模型测量骨再生和癌细胞骨相互作用，通过与癌细胞和组织学的共培养。

我们还通过定量实时 PCR 验证数据。这种外体模型具有许多优点，如三维组织和骨骼的细胞多样性得到保存，可以控制实验条件。此外，模型很简单，可以在短时间内看到结果，而且成本低。

它可以与其他技术相结合，如定量实时PCR，显微镜和微型CT。