与PSD分数相比，可以识别对树突纤维蛋白丰富的分数周围未成熟的突触作用的突触蛋白。我们用活神经元来诱导噬菌蛋白的帽形成。该技术的主要优点是，在人工起源中的活性蛋白质可以识别从树突纤维蛋白丰富的分数。
首先， 通过溶解100毫克维生素B5、100毫克胆碱、100毫克叶酸、180毫克I-inositol、100毫克维生素B3、100毫克维生素B6盐酸盐和100毫克盐酸硫胺，在500毫升超纯水中溶解200毫克维生素B6和100毫克盐酸硫胺。小心地将等分液混合在 50 ml 管中，并在 20 摄氏度下储存。要准备核黄素溶液，使用磁力搅拌器在500毫克超纯水中溶解100毫克核黄素。
小心地将等分液混合在 50 ml 管中，并在 20 摄氏度下储存。使用磁力搅拌器在50ml超纯水中中溶解7.35克氯化钙。对于最低基本中制剂，使用磁力搅拌机溶解400毫克氯化钾6、800毫克氯化钠、2 200毫克碳酸氢钠、158毫克磷酸钠单基二水合物、7000毫克D-葡萄糖、200毫克硫酸镁和950毫升超纯水。
接下来，使用一个1ml移液器，在磁搅拌器上不断搅拌，以滴滴的方式将1.8ml的1摩尔二氯化钙加入到 MEM中。然后加入盐酸，将 MEM 的 pH 调整为 pH 7.25。然后，在 MEM 中加入 5 ml 200 倍维生素混合物和 200 微升核黄素溶液。
使用超纯水将溶液的体积调整为 1000 ml。使用 0.22 微米过滤系统过滤溶液，并将其储存在 4 摄氏度。准备10倍DNase-1库存溶液溶解100毫克Dnase-1在12.5毫升的HSSS。
通过 0.22 微米过滤器过滤，在 1.5 ml 管中加入等分，并在 20 摄氏度下储存管。对于 Ara-C 库存溶液制备，在 8.93 ml 的超纯水中溶解 25 毫克 Ara-C。通过 0.22 微米过滤器过滤，在 1.5ml 管中等分，并在 20 摄氏度下储存。
要准备电镀介质， 混合 1 ml MEM 氨基酸溶液、750 微升 1 摩尔 HEPES、1 ml B27、125 微升 200 毫摩尔谷氨酰胺、250 微升青霉素链霉素、2.5 ml 胎儿牛血清和 44.375 ml MEM 在 50 ml 管中。为了准备停止介质，在 50 ml 管中混合 1 ml MEM 氨基酸溶液、750 微升 1 摩尔 HEPES、5 ml FBS 和 43.25 ml MEM。准备HPSS，辅以15毫摩尔 HEPES，混合49.25毫升HPSS，和750微升1摩尔HPES。
对于聚-l-lysine涂层盘的制备，在25摄氏度下，用每毫升聚-l-lysine氢溴化物涂覆35毫米塑料细胞培养盘，一天。接下来，用2毫升超纯水洗三次，并在25摄氏度下用1.5毫升的停止中，直到使用。在HPSS中，在含有500微升的混合物中孵育解剖的海马，每含有2.5%的三辛和10倍Dnase-1，辅以15毫摩尔海佩斯、pH7.2，在37摄氏度下，每3分钟搅拌15分钟。
然后，将海马转移到10毫升的停止中等和孵育在4摄氏度5分钟，以灭活的尝试性。接下来，在4摄氏度的10毫升新鲜停止介质中孵育解剖的海马，5分钟。将海马移入10毫升新鲜停止介质，并在4摄氏度下孵育5分钟。
然后，将海马移动到停止介质的 900 微升中，在 15 ml 管中将 100 微升 10X Dnase-1 移入 100 微升中。使用1ml移液器通过移液20次将海马分离成孤立的神经元。加入9ml电镀介质，通过70微米细胞过滤器过滤到50毫升的管子中。
使用血细胞计计算细胞数量，并在电镀介质中每毫升调整为 3.5 倍至第四个细胞。接下来，从聚-l-利辛涂层的盘式中吸出停止介质。板2毫升每盘细胞在涂层的盘子和孵育下5%二氧化碳在37摄氏度60-64小时。
孵育后，在神经元中加入2微升的阿拉-C股票溶液，慢慢摇动盘子。将培养皿放在加湿的盒子里，在 37 摄氏度下不改变 5%二氧化碳以下的培养基。通过首先将每道菜中300万个磁性聚苯乙烯微珠添加到20个含有培养神经元的盘子中，在体外13天后净化树突纤维素丰富的分数。
一天后，用三次洗涤1mlPBS中的神经元，去除中联微珠和未绑定的微珠。取出PBS后，每盘解解缓冲液用500微升来解化神经元。接下来，用细胞刮刀收集酸盐，将落酸转移到10个低蛋白结合微管中。
将管子放在磁铁分离器上，等待一分钟。收集上一液，并用作银染色和西方印迹分析的未绑定分数。接下来，将珠子转移到新的低蛋白结合微管中，并在磁性分离器上设置一分钟。
完全去除上流液，并添加 500 微升的解液缓冲液。使用涡流混合器清洗珠子 15 秒钟。重复清洗珠子10次，取出上一除。
通过加入50微升1X SDS样品缓冲液，将管子在98摄氏度下煮沸5分钟，将蛋白质分解到珠子上。以 860xG 3000 RPM 离心管 10 秒钟，将管放在磁性分离器上 1 分钟。收集上一液，并使用它作为绑定分数。
通过 BCA 蛋白质测定测量未绑定和绑定蛋白质分数的浓度。可视化具有布罗莫苯蓝色蛋白素溶液，并调整浓度为每微升5纳米的SDS页面。使用 5-20% 梯度凝胶按 SDS 页面分离绑定和未绑定分数。
银色污渍凝胶。最后，根据手稿，使用适当的原抗体和二级抗体的西方印迹。在培养的海马神经元中，TLCN被大量局部化到树突状纤维素、轴和索马，并与F-actin共同本地化。
编码的珠子主要与树突结合，通过神经元树突的TLCN和F-actin的积累，诱导噬菌体的形成。Thorecense 图像显示， 噬菌体杯的形成在很大程度上取决于 Tlcn 在树突中的存在。噬菌体杯只在野生型海马神经元上形成，而不是在TLCN的抗性海马神经元上形成。
SDS页面结果显示，未绑定和绑定分数的蛋白质带模式几乎相同，但50和70千达顿（绑定分数）的强度低于未绑定分数中的强度。然而，从TLCN抗性培养海马神经元编写的未绑定和边界分数之间，带强度没有明显差异。西方对未绑定和绑定分数的印迹分析表明，TLCN和VN主要在绑定分数中检测。
Actin、 Ezrin 、 G alpha q 、 PLC beta 1 、 MAP-2 和 Spectrin， 在绑定和未绑定分数中均检测到。在未绑定分数中检测到莫辛、PSD-95、阿尔法-阿皮宁和阿尔法-图布林。如果微珠的涂层蛋白发生变化，可采用此程序识别测定相互作用。
这种技术可以识别对人造物质的蛋白质。因此，我们相信机制人工起源可以量化。我们相信，与精神障碍相关的新蛋白质可以从富含树突的纤维蛋白分馏中识别出来。
并可以扩展到治疗。
