斑马鱼手术尺寸缩小术中胚胎形态缩放的研究

虽然规模是发育系统的普遍和基本属性之一，但许多器官和组织尚未了解其基本机制。本视频中介绍的斑马鱼的尺寸缩小技术将促进您对动态缩放过程基础机制的理解。与斑马鱼合作的优点是易于进行活成像、遗传学和定量分析。

我们的技术也非常简单，易于应用，没有任何专门的设备或强化培训。胚胎的健康是这项技术成功的关键。使用幼鱼作为父母，并小心通过去除胆小鱼尽量减少损害。

也玩在蛋黄的伤口大小，和多少细胞被移除。由于我们使用的胚胎非常年轻和脆弱，在移植和切菜时需要非常小心地处理。同时，它需要快速，以便程序可以在正确的时间窗口完成开发。

视觉演示可以让人们了解如何有效地产生更小的胚胎。为了制作用于胚胎切的钢丝环，通过玻璃毛细管将20厘米长的硬质和非腐蚀性不锈钢丝喂给，在顶部形成一个1毫米长的小环。将一小滴透明指甲油放在等级毛细管的尖端，在毛细管和钢丝环之间，以将指甲油放在到位位置，确保不将任何指甲油放在环上，因为它可能会损坏胚胎。

然后让它干。使用实验室胶带将带环的玻璃毛细管连接到木筷子上，使大约两厘米半的玻璃毛细管延伸到筷子之外，使工具的筷子部分以后不会浸入水中。在100毫米玻璃培养皿中，用塑料铲将约0.5毫升的2%甲基纤维素分散在底部中心附近，均匀地摊开约0.5毫米的厚度。

将约30毫升的三分之一林格溶液倒入菜面，并允许其扩散到盘子的其余部分，覆盖甲基纤维素。将先前脱卵的胚胎放在256个细胞的K细胞阶段，放在2%甲基纤维素上，确保胚胎被定向到它们的一侧。要切割炸管，请使用电线环在动物杆附近切割，垂直于动物植物轴，并切掉大约 30 到 40% 的爆炸细胞。

然后轻轻敲击两端，帮助剩余的细胞粘住。对于蛋黄，使用安装的电线在植物杆附近通过划破蛋膜，使蛋黄渗出几分钟，然后愈合。当蛋黄停止渗出时，使用移液器将胚胎移出同一盘中的甲基纤维素以进行恢复。

对所有胚胎重复炸管和蛋黄切，然后在胚胎恢复时让盘子不受干扰30分钟。然后，使用玻璃移液器将胚胎转移到先前准备的35毫米玻璃盘中，其中含有新鲜三分之一的林格溶液，并把它们放在28.5摄氏度的培养箱中，以便完全恢复，然后再继续成像。在用胚管和蛋黄进行两步切后，胚胎在发育阶段与控制胚胎相比，除了大小差异，似乎是正常的整体形态。

另一方面，仅被切碎的胚胎则表现出一种特殊的形态，尤其是在早期阶段。在表皮期间，胚胎有收缩和缩进的外观。在以下索米特阶段，中线结构被发现在许多轴向层被夷为平地。

在后期阶段，与蛋黄相邻的体体结构，如中脑和后脑仍然表现出相对扁平的形状，可能是因为相对较大的蛋黄的张力增加。索米特形成的时间推移成像表明，在对照胚胎和切碎的胚胎中，后期形成的卵石大小与早期形成的胚胎大小相比较小。此外，在整个苏米特形成阶段，切碎的胚胎比控制胚胎的胚胎小。

当两步切克技术在膜mCherry注射胚胎上进行时，受精后20小时脊髓的成像显示，由于尺寸缩小，神经管高度降低。两步斩波对于获得更小但正常的胚胎具有高效率非常重要。重要的是要记住，不要切蛋黄，同时从爆炸中切掉细胞。

对于蛋黄，做一个小伤害，它的内容渗出。蛋黄膜将在适当的缓冲液中自然愈合。由于切碎的胚胎可以快速恢复，因此任何方法或分析都可以应用于正常胚胎，可以按照缩小尺寸的方法进行。

这种技术的简单性和多功能性是非常强大的，因为任何人都可以引入这种技术来研究斑马鱼中任何组织或器官的结垢问题。我们相信，通过这项技术，研究人员可以解决各种系统以前未触及的缩放问题。我们已经在苏米特和神经管模式的缩放方面取得了重要的发现。