一种简单有效的斑马鱼胚胎移植装置

该技术能够通过移植异位信号源来研究胚胎发生过程中信号分子的功能和范围。它还有助于种系突变体的有效产生。该协议可以应用于胚泡期斑马鱼和青鲮鱼胚胎，也可能适用于其他胚胎阶段和TDO物种。

要组装移植装置，请使用诱饵锁接头将诱饵尖端25微升气密注射器连接到微型移液器支架。然后将设备直接安装到手动微型机械手上。要使用移植装置，请将带有组装装置的微型机械手放在体视显微镜旁边。

然后取下柱塞并插入移植针。将针头以45度角放入装满林格溶液的培养皿中，直到针尖浸入。将柱塞插入大约一半以冲洗出Ringer的溶液，在针的薄锥形部分只留下少量水。

首次使用移植针时，通过从牺牲的胚胎中吸取轭并完全排出轭材料来涂覆针头的内部。接下来，使用移植针，轻轻地定位供体胚胎，然后将针头开口与胚胎表面正交放置，并小心地拉动柱塞将细胞吸入针中。一旦所需数量的细胞被吸入，通过轻轻地向下推动柱塞来停止吸力，并通过以短而快速的运动将针头从胚胎中取出。

通过将细胞限制在针的锥形末端，在细胞柱的任一侧留下一些林格溶液。通过缓慢上下移动柱塞并用Ringer溶液清洗细胞来清除任何剩余的蛋黄或细胞碎片。接下来，用非优势手移动移植皿，将针头与宿主胚胎表面正交放置。

通过小心地将其挤压在壁上，对胚胎施加轻微的压力。然后以快速的剧烈运动，刺穿宿主胚胎的包裹层，注意不要用针刮伤蛋黄。一旦针头进入，轻轻推动柱塞将细胞柱挤出到胚胎中，同时缓慢地缩回针头。

对于生殖细胞的移植，用Ringer溶液填充移植皿，然后将去角球转移到圆顶阶段的胚胎到移植培养皿中，并将宿主和供体胚胎置于交替柱中，将细胞从一个供体胚胎移植到六个不同的宿主胚胎中。为了进行移植，将边缘的胚胎朝向移植针。对于种系移植，从边缘取出源细胞并将其沉积到宿主胚胎中的相同位置。

移植完成后，让胚胎在林格溶液中恢复30分钟至一小时。然后使用荧光体视显微镜检查移植的细胞。接下来，将胚胎转移到24孔琼脂糖包被的板中，其中胚胎培养基将所有从同一供体接收细胞的宿主胚胎分组到同一孔中。

然后将胚胎在28摄氏度下孵育至第二天。如果需要，将供体胚胎转移到标记的PCR条中进行基因分型。受精后30小时，在荧光体视显微镜下筛选宿主胚胎以成功进行种系移植。

生殖细胞应存在于蛋黄延伸上方的凹槽处。根据标准饲养条件将成功移植的幼虫培养成成苗。在成功的移植中，胚胎看起来正常，形状和蛋黄清晰度与未移植的胚胎相似，胚泡中没有大撕裂。

相反，如果胚胎在移植过程中明显受损，它将无法正常发育。虽然移植装置主要用于斑马鱼胚胎的胚芽发育阶段，但移植和细胞灭绝也可以在日本稻鱼青鲽的胚芽孢子期胚中进行。在种系移植的特定情况下，良好的移植导致胚胎在卵黄边缘正上方具有长水平细胞柱。

然而，当生殖细胞的荧光与体细胞不同时，只有在受精24至30小时后才能评估该程序的成功。原始生殖细胞将在蛋黄延伸正上方的凹槽中显示为小荧光球。这些生殖细胞在正确位置的存在表明生殖系移植成功。

此处显示了不成功移植的示例。在第一个例子中，尽管生殖细胞已经到达性腺中胚层，但由于宿主胚胎严重变形，它不会正常发育。在第二例中，荧光细胞仅在沟槽外被检测到。

这些细胞要么是体细胞，要么是未能正确迁移的生殖细胞。而且这两种细胞类型都不会对胚胎的生殖系做出贡献。避免损伤移植细胞和宿主胚胎至关重要。

应缓慢抽取细胞，清除任何剩余的蛋黄，并小心插入。该方法提供了一种在斑马鱼胚胎中移植细胞的简单方法，并且对于产生异位源和种系突变体非常有用。这种设备的主要优点是成本低廉，而且用途很多。